微生物实验本科4pfc试验.pptxVIP

实验四 一、PFC实验二、免疫学实验考核7A208蒋朋飞一、实验目的掌握PFC试验的基本原理及实验方法； 了解PFC试验的意义。二、实验原理 抗原刺激B细胞活化分泌特异性抗体抗原抗体复合物经典途径激活补体系统小鼠B细胞溶血空斑形成试验溶血空斑试验是基于抗原抗体反应可活化补体，溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外试验方法，用于检测动物的抗体产生功能的经典的试验。将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。 B细胞浆细胞SRBC 免疫小鼠4d后实验流程脾细胞悬液的制备处死小鼠，取脾脏，研磨，制备单个脾细胞悬液脾细胞悬液 + 15%SRBC + 补体灌注小室制作小室取洁净载玻片两张实验流程用双面胶在中间和两端各粘一条，将两张玻片黏在一起即成2个小室配制小室灌注液实验流程 实验管（μl） 对照管 （μl） Hank’s液500 600脾细胞悬液100 10015%SRBC 100 100补体100 -混匀，灌注小