HPLC有关物质检测方法学验证中需要注意的问题（一） .docxVIP

PAGE PAGE 1 HPLC有关物质检测方法学验证中需要注意的问题（一） 建立分析办法的目的是通过对药品的检测实现对药物从生产到用法的各个环节的质量控制。要检测药品的批间差异或不同来源的产品之间的差异，对有关物质检查而言，除线性范围、耐用性外，特殊要注重分析办法的专属性、检测限或定量限。 1. 专属性专属性是指其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)存在下，采纳的分析办法能正确测定被测物的能力，对HPLC法举行有关物质检查而言，就是要保证药品中的杂质、降解物或潜在杂质与主成分色谱峰的良好分别，对于需要控制的已知杂质，还必需保证已知杂质之间以及已知杂质和未知杂质或潜在杂质之间的分别度。为了获得有关物质与主成分以及各杂质之间的良好分别，在等度洗脱不能满足要求时通常要举行梯度洗脱。梯度洗脱中应用最多的是线性梯度，色谱工作站也可以按照需要设定不同的梯度程序。专属性的另一个含义是指分析办法对杂质的检出能力。虽然有许多检测器比如电化学检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器(ELSD)或荧光检测器等可供挑选，但目前有关物质检查中最常用的检测器还是紫外一可见分光光度(或DAD)检测器，因此只能对有紫外汲取或荧光汲取的杂质举行检测，对于和等没有紫外汲取的药物中的杂质分析很困难，虽然可以采纳210nm甚至200nm的波进步行检测，但杂质在此波长可能有紫外汲取也可能没有。有时杂质的响应可能会远远大于主成分，比如胆酸HPLC纯度惟独95%，但是DSC纯度表白该物质的纯度为99.5%。随着联用技术的普及，与多种检测仪器比如NMR、MS、R的联用将使HPLC技术的应用更为广泛。一个药品的杂质谱也是一个特定生产工艺的“指纹”，可用于鉴别药物的来源。通常状况下，对制剂中的有关物质，更多的是关注降解产物。在复方制剂有关物质的检查中，当不能采纳一个色谱系统对全部复方组分的有关物质举行检测时，就需要采纳两个系统或多个系统举行有关物质检查，并且要保证其他组分的主成分、已知杂质和潜在降解产物对待测组分的杂质检出没有干扰。比如复方布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂，采纳不同的色谱系统对复方组分分离举行有关物质检查。布地奈德有关物质的检查采纳两根色谱柱串联而成，第一根色谱柱为正相柱(Supelcosil Si,50mm×4.6mm)，其次根色谱柱为反相柱(Supelcosil RP C18，150mm×4.6mm)，采纳梯度洗脱举行有关物质检查(图14-19、图14-20)，其中图14-19中的色谱峰1、2、3、4为布地奈德的已知杂质。除复方制剂可能需要通过色谱柱串联举行有关物质检查外，为了增强HPLC有关物质检查法的专属性，亦可将相同的色谱柱举行串联以提高杂质与主峰及各杂质之间的分别度，如碘帕醇有关物质检查采纳了两根苯基柱相连，采纳梯度洗脱程序举行分析(图14-21)。图14-19 复方制剂中布地奈德有关物质检查1. 16-羟基泼尼松龙；2. D-胡莫布地奈德；3.21-脱氢布地奈德；4. 14,15-脱氢布地奈德；5．布地奈德＋福莫特罗图14-20 复方制剂中布地奈德有关物质检查1．布地奈德异构体B; 2．布地奈德异构体A；3.福莫特罗图14-21 碘帕醇有关物质检查色谱柱：两根Agilent ZORBAX SB-Phenyl (4.6mm×250mm, 5um)串联检测波长：240nm