紫外-可见分光光度计操作规程完整.pdfVIP

紫外 - 可见分光光度计操作规程 (TU1810) 1．目的：制订本标准的目的是为规检验人员在质量检验过程中的操作，保证检验结 果的正确性。 2．适用围：本标准适用于二厂检验员对产品质量的检验。 3．职责： QC 检验员对本标准的实施负责。 4．程序： 4.1 简述 紫外 - 可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进展分 析的一种仪器分析方法。 这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子 能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。 朗伯—比耳定律〔 Lambert— Beer〕是光吸收的根本定律，俗称光吸收定律，是 分光光度法定量分析的依据和根底。 当入射光波长一定时， 溶液的吸光度是吸光物质 的浓度与吸收介质厚度〔吸收光程〕的函数。其常用表达式为，式中为系数： A= ε·ι·C 式中A为吸光度； ε为吸收系数； C 为溶液浓度； ι为光路长度。 如溶液的浓度〔 C〕为 1% 〔g/ml 〕，光路长度〔 L〕为 1cm，相应的吸光度即为吸 1 % 收系数以 表示。如溶液的浓度〔 C〕的摩尔浓度〔 mol/L 〕，光路长度为 1cm时， 1cm E 那么相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。 4.2 仪器 紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。根 据光路设计的不同， 紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、 双光束分光光 度计和双波长分光光度计。 4.2.1 仪器测量条件选择 1. 测量波长的选择 max 通常都是选择最强吸收带的最大吸收波长λ 作为测量波长，称为最大吸收原那 么，以获得最高的分析灵敏度。而且在λ max附近，吸光度随波长的变化一般较小， 波长的稍许偏移引起吸光度的测量偏差较小， 可得到较好的测定精细度。 但在测量高 浓度组分时，宁可选用灵敏度低一些的吸收峰波长〔ε较小〕作为测量波长，以保证 校正曲线有足够的线性围。如果λ max所处吸收峰太锋利，那么在满足分析灵敏度前 提下，可选用灵敏度低一些的波长进展测量，以减少比耳定律的偏差。 2. 适宜吸光度围的选择 任何光度计都有一定的测量误差，这是由于测量过程中光源的不稳定、读数的不 准确或实验条件的偶然变动等因素造成的。 由于吸收定律中透射比 T与浓度 C是负对数 的关系，从负对数的关系曲线可以看出，一样的透射比读数误差在不同的浓度围中， 所引起的浓度相对误差不同，当浓度较大或浓度较小时，相对误差都比拟大。因此， 要选择适宜的吸光度围进展测量，以降低测定结果的相对误差。 在实际工作中，可通过调节待测溶液的浓度或选用适当厚度的吸收池的方法，使 测得的吸光度落在所要求的围。 3. 仪器狭缝宽度的选择 狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性围。 狭缝宽度过大时， 入 射光的单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变 弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽 度的方法是： 测量吸光度随狭缝宽度的变化。 狭缝的宽度在一个围， 吸光度是不变的， 当狭缝宽度大到某一程度时， 吸光度开场减小。 因此，在不减小吸光度时的最大狭缝 宽度，即是所欲选取的适宜的狭缝宽度。 4.3 紫外- 可见分光光度计的检定 4.3.1 波长示值误差与重复性 仪器波长示值误差指标为± 0.3nm，波长重复性指标为 0.2nm，您可以用仪器氘灯 的两条特征谱线检验，具体检验方法如下： ①确认仪器光谱宽带为 “2.0nm〞。开机初始化完成后， 按数字 5键进入系统应用界面， 在系统应用界面中按数字键 2强狭缝设定为“