外周血染色体核型分析PPT课件.pptVIP

2017 医学卫生。 教学培训。 * 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 * 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 医学卫生。 教学培训。 外周血染色体核型分析 D区，合作共建团队，大客户团队 2018.06.23 * 背景知识（Background information) 染色体与遗传病： Genetic Disease 染色体的多变性： Variability 染色体的畸变： Aberration 多达300多种因染色体异常而导致的遗传疾病 46条染色体在不同的人体内存在恒定的微小变异 （无表型效应or病理学意义） 一定条件刺激下 （Eg. 药物、射线、病毒或母亲年龄），染色体会发生数目或结构畸变。 * 背景知识 (Cont.) 染色体畸变 – 数目改变： Quantity changes 染色体畸变 – 结构异常： Unusual structure 多倍性：体细胞染色体数目成倍增加。 原因： 双雄受精，双雌受精，核内复制。 非整倍性： 体细胞染色体数目增加或少一条或数条。原因： 减数分裂染色体不分离或丢失。 缺失：染色体臂中段或末端丢失。 倒位：某一染色体中间片段发生两个断裂，断片倒转180°后重接。 易位： 转位，平衡易位，罗伯逊易位 * 简介 (Introduction) 染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象。 外周血染色体核型分析可直接在染色体上显示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化， 而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等结构上的异常，因而其检测可用在遗传病以及产前婚前孕前的诊断上。 概念： Concept 目的： Purpose * 染色体核型技术检测 （遗传病诊断）： Eg. 唐氏综合症 (21-3体)，Patau综合症(18-3体)， Edwards综合症(13-3体)。 明显体态异常，智力低下，发育障碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情异常 第二性征异常或外生殖器两性畸形。 女性原发性闭经、继发性闭经或男子无精 长期接触X线、电离辐射、有毒物质的人员 恶性血液病患者 简介 (Cont.) * 染色体核型技术检测 （产前婚前孕前诊断）： Eg. 猫叫综合症 （5P综合症), 特纳综合症， 先天性睾丸发育不良综合症，超雄综合症 (XYY综合症)， 超雌综合症(XXY综合症)。 多发性流产，死胎和不孕不孕的夫妇 35岁以上高龄孕妇 已生育过染色体异常患儿的夫妇，或双方或一方具有遗传病家族史 夫妇双方或一方为可疑或已知的染色体数目或结构异常的患者 婚前孕前检查希望进行优生优育检查的人群 简介 (Cont.) * 项目介绍 (Project)- 外周血染色体核型分析 临床应用： Application 检测方法： Method 样本量： Sample 染色体异常是导致自然流产、胚胎停止发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者进行染色体分析，在临床诊断和优生优育方面有重要意义。 培养法G显带 肝素抗凝全血2.0ml * 实验原理： Test Principal 外周血中淋巴细胞在含有植物血凝素(PHA)的培养基中培养68-72小时，进入生长旺盛的有丝分裂期； 之后加入秋水仙素抑制纺锤体形成，使其停留在细胞分裂中期； 再经过氯化钾溶液低渗、固定、滴片制片、胰酶消化、姬姆萨染色，在油镜下可观察到每个分裂期的染色体形态及数量。 项目介绍 (Project)- 外周血染色体核型分析 (Cont.) * 实验操作： Test Procedure 1.接种：先在每瓶含有PHA的5ml培养基的培养瓶中接种0.5ml的外周血，接种2瓶。 2.培养：37℃全封闭式培养68-72h。在细胞收获前加入0.1ml浓度为20ug/ml秋水仙素培养1-1.5h。 3.细胞的收获： 1）用离心机以2200转/分钟离心5分钟后弃上清液。 2）加入0.075M的KCl溶液10ml，充分混匀，低渗时间为15-18分钟 。 3）预固定：低渗后加入固定液1ml充分混匀（固定液是甲醇与冰乙酸按3：1混匀），以2200转/分钟离心7分钟。 4） 吸弃上清液，加入10ml的固定液，混匀。 项目介绍 (Project)- 外周血染色体核型分析 (Cont.) * 5）用离心机以2200转/分钟离心7分钟，吸弃上清，加入10ml 固定液轻轻混匀（两管合一），2200