微生物检验技术绪论 .pptxVIP

微生物检验技术绪论微生物的概念和种类 (二)微生物的种类与命名 1、非细胞型微生物 2、原核细胞型微生物 3、真核细胞型微生物微生物检验技术的发展趋势微生物检验常规技术包括显微技术,染色技术,灭菌和消毒技术,培养基制备技术,接种,分离纯化和培养技术,无菌取样技术,微生物的计数技术,菌种保藏技术,微生物常规鉴定技术等。传统常规的微生物检测方法检测时限长,过程烦琐。随着食品、药品及其他工业的发展以及人们对各类产品质量安全的重视,传统检测方法差不多远不能满足微生物检测的需要,迫切需求灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的微生物检测技术和方法,建立和完善习惯国际贸易的各类产品微生物检测技术和体系迫在眉睫。传统检验技术显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一,也是应用比较早的技术。实验室中常用的有普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。利用血细胞计数器在显微镜下直截了当计数是一种常见的微生物计总数的方法。传统检验技术革兰氏染色技术:是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。培养计数法:平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂在平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,依照其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。菌落形成单位cfu,colony-forming unit 。现代微生物检测技术近几年世界各国的许多机构和学者都致力于快速、简便、特异、敏感、低耗且实用的检测技术和方法的研究。对微生物的检测,其研究的技术手段产生了特别大的变革:微生物检测技术已由培养水平逐步向分子水平迈进;近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统,将从根本上改变微生物的检测方法;气相色谱法、气质联用等现代仪器分析法也应用于微生物检测中。基因芯片技术基因芯片:采纳微加工和微电子技术将大量的人工设计好的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体而得到的一种信息检测芯片,其本质名称是脱氧核糖核酸微阵列(DNA微阵列)。基因芯片的工作原理:利用碱基配对的原则来检测样品的基因。将各种基因寡核苷酸点样于芯片表面,将待测微生物样品的DNA或RNA通过PCR或RT-PCR扩增、体外转录等技术掺入标记分子后,与位于芯片上的已知碱基顺序的DNA探针杂交,再通过扫描系统检测探针分子杂交信号强度,然后以计算机技术对信号进行综合分析后,即可获得样品中大量基因序列及表达信息,以对之做出定性及定量的研究,来确定检测样品是否存在某些特定微生物。目前,在世界各国的积极推动下,基因芯片的应用从最初的医学领域向其他方面扩展。近几年来,基因芯片的应用也开始在食品工业中崭露头角,许多学者利用基因芯片对食品中的常见致病菌进行了分析、检测,不仅敏感度高于传统方法,且操作简单,重复性好;基因芯片技术也是近几年运用的病毒检测新技术之一,现在世界各国都在积极地进行能够对人类构成危害的各种病毒快速检测芯片的研究;应用基因芯片可对病人、出入境食品、动植物及其产品进行检测。随着社会的发展和科技进步,特别是近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统,将从根本上改变微生物的检测方法。仪器法的应用1、电阻电导检测器原理是当细菌生产繁殖时,将蛋白质、糖类等大分子物质分解成氨基酸、有机酸等带电荷的小分子物质,改变培养液的导电度,如此,测量电阻和导电度的变化,就可推算出样品原来的含菌数。Bactometer系统是利用电阻抗、电容抗或总阻抗等三种参数的自动微生物监测系统。它能快速测定样品中细菌的污染程度,从而快速提供品质控制的信息。应用电阻抗技术的全自动微生物监测系统——BACTOMETER用于快速检测食品、化妆品、药品等的细菌总数、大肠菌群、酵母菌/霉菌、乳酸菌数…2、 微型全自动荧光酶标分析仪(Mini-VIDAS)主要应用酶联荧光技术(ELFA),ELFA技术具有优异的敏感性和特异性。可检验李斯特氏菌、单增李斯特氏菌、沙门氏菌、葡萄球菌肠毒素、空肠弯曲杆菌、大肠杆菌O157等。使用该仪器操作简便,只需加1次样品,按1次键,整个检测过程都由仪器自动完成。3、微生物的微型、自动化鉴定系统API系统:法国 Bio-梅里埃公司生产,有 20 种不同的生化反应,可鉴定 700 多种细菌,分不同系列,如 20A—厌氧菌,20E—肠道菌,为长形卡片。Enterotube系统:美国罗氏公司生产,用一条有8-12个分隔小室的划艇形塑料管制成,面上覆盖膜。有 15 种生化反应,专门鉴定肠道菌。Biolog系统: 96孔板型,美国安普公司生产,可自动化鉴定,可鉴定 1140 种细菌。BBL系统:BD公司专门为中小型微生物实验室以及科研机构设计的经济型微生物鉴定系统。 细菌半自动鉴定系