药分第三章总论.pptxVIP

药物分析学 总论第三章 样品前处理和药物提取技术目 录1第一节 生物样品的采集、制备、贮存2第二节 生物样品的预处理3第三节 提取分离及相关技术4第四节 化学衍生化第五章 体内药物分析体内样品的特点：1、采样量少2、待测物浓度低3、干扰物质多体内药物分析的特点：1、体内样品需经分离与浓集，或经化学衍生化处理后才能进行分析2、对分析方法的灵敏度及专属性要求较高3、分析工作量大测定方法：色谱分析法，免疫分析法和生物学方法。第一节生物样品的采集、制备、贮存器官、组织体液生物样品血液、尿液、唾液、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等第一节 常用体内样品的制备与贮藏 一、体内样品的种类二、体内样品的采集和制备（一）血样——血浆、血清和全血 ——体现药物浓度和治疗作用之间的关系。 ——最常用的生物样本。 1.血样的采集：注射器 、毛细管眼眶采血、静脉插管手术、 滞留针股静脉取血 动物实验时，采血量不宜超过动物总血量的十分之一。2500~3000r/min置含抗凝剂试管中血浆静脉血离心5~10min抗凝剂：二、体内样品的采集和制备2.血样的制备： 测定血中药物的浓度，通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，尤其是血浆，并非指全血。① 血浆（ plasma ）的制备 肝素（最常用）、EDTA、枸橼酸盐、草酸、 氟化钠。37oC or 室温放置拨去血饼置无抗凝剂试管中静脉血30~60min2500~3000r/min血清离心5~10min二、体内样品的采集和制备2.血清（ serum ）的制备 血浆比血清的分离快，而且制取的量约为全血的50%~60%，血清只为全血的20%~40%，多数研究者用血浆进行分析测定。置含抗凝剂试管中静脉血全血保持血浆和血细胞的匀相状态二、体内样品的采集和制备3.全血（ whole blood）的制备 应用：若需专门测定平均分布于血细胞内、外的药物浓度；血浆内药物浓度波动太大，且难以控制二、体内样品的采集和制备 血样主要用于药物动力学、生物利用度等研究及临床治疗药物浓度监测。——最常用的生物样本。（二）尿样 体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型、Ⅰ相及Ⅱ相代谢物等多种形式排出。尿液的采集 ——用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、内源性活性物质、药物代谢分型及代谢物等的研究测定。（二）尿样1.尿样的特点尿液的采集 尿液中药物浓度较高，收集量可以很大，但易受食物种类、饮水多少、排汗情况的影响。一般以某一段时间或单位时间内尿中药物的总量（排泄量或排泄率）表示。（二）尿样2.尿样的采集：尿液的采集 采集的尿是自然排尿。尿包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。测定方式——测定一定时间内排入尿中的药物总量样本采集——时间尿（在规定时间区间内采集）, 并测量每次收集的尿液体积。（三）唾液（saliva） 一些药物的唾液药浓(S）与血浆游离药浓（P）密切相关，因此：——TDM中利用对S的测定代替对P的监测——药代动力学的研究（三）唾液（saliva）1.唾样的采集： 在潄口后15min，安静状态下采集口腔内自然流出的唾液；也可在刺激下快速采样(需注意干扰)。物理法(口嚼石腊片、聚四氟乙烯块或纱布球等)化学法(将柠檬酸或维生素C等置于舌尖)弃去初始部分后采集（三）唾液（saliva）2.唾样的制备 唾样采集后，立即测量其除去泡沫部分的体积，以3000rpm离心10min，取上清液直接测定或冷冻保存。（四）组织用于在药物的动物试验及临床上由于过量服用药物而引起的中毒死亡时，为药物的体内动力学过程提供重要信息。常用的组织：胃、肝、肾、肺、心、脑等1.组织样品的制备：制成匀浆溶液2.组织样品的处理：沉淀蛋白法；酸水解或碱水解；酶水解法（五）头发可用于体内微量元素的含量测定；也可用于用药史的估计、临床用药物和非法滥用药物的甄别以及1.头发样品的采集：微量元素在前额部位的头发中含量最低，枕部含量最高，应从枕部取样，采集时从发根部（靠近头皮约1cm处)，剪取0.5-1g的头发（五）头发2.头发样品的洗涤：丙酮-水-丙酮3.头发样品的处理：直接甲醇提取；酸水解（0.1mol/L盐酸）；碱水解（1mol/L氢氧化钠）；酶水解（最常用）。三、体内样品的贮存与处理(一）最常用的方法——冷藏或冷冻冷藏—冰箱(4℃)中—短期保存(1~2d) 冷冻—冷柜(-20℃)或低温冷柜(-80℃)中—长期保存 ——冷藏或冷冻的时限：经稳定性考察后确定三、体内样品的贮存与处理 1、血样的贮藏 采集后及时分离血浆和血清（≤2h），分离后置硬质玻璃试管中或EP管中完全密塞后再贮存。 三、体内样品的贮存与处理 2、唾液样品的贮藏 ——测定唾液pH时应在取样的当时测定。 ——为阻止酶催化生成粘蛋白，应在4℃以 下保存 ——冷冻保