学生展示4离心技术的应用final.pptx

离心技术的应用by 王岱东 蒋康 林垸斌 杨扬 张最1.离心现象向心力：使质点作曲线运动时所需的指向曲率中心的力离心现象：当外力无法提供足够大的向心力时，质点的行为称为离心现象离心技术：利用电机高速旋转产生离心力场，根据不同物质之间密度、形状、大小等方面的差异，对悬浮液中混合的不同颗粒或乳浊液中密度不同且互不相溶的液体进行分离和提取的技术。其中使用到的仪器称为离心机。1.离心技术按转速：按目的：Stoke’s定律：V=d^2（ρ-ρ0）g/18ηRCF=mω2r/mg=(2π·rps) 2r/g2. 分析型超速离心化合物吸附薄层色谱吸附柱层析通透层析气-液色谱离子交换色谱电泳超速离心氨基酸++--+++++++-多肽++-+-++++-蛋白质--+++-+++++++嘌呤/嘧啶++---+++++-核酸+-++-+++++单糖/二塘+++-++++-寡/多聚糖-++++---++脂肪酸+++-++---磷脂+++-----(类)固醇++++-----2. 分析型超速离心判定大分子纯度沉降常数测定分子量测定检测大分子中构象变化3.1 差速离心法概念：根据颗粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系数)的差异，通过分级提高离心转速或高速与低速离心交替进行．使具有不同质量的颗粒样品(或大分子)从混合液中分批沉降至管底，从而实现分离目的。适用于：混合样品中各沉降系数差别较大的组分之间的分离，更准确地说是沉降系数差别在l至几个数量级的混合样品的分离，差别越大，分离效果越好。3.1 差速离心法检出量脓性标本(75)非脓血穿刺(63)甩片33经差速离心后4915提高血细胞涂片细菌检出率，降低检菌：常规涂片易出现G+假阳性、G-假阴性。差速离心处理后涂片检出率更高。纯化病毒：差速离心法提纯禽脑脊髓炎病毒效果良好3.2 密度梯度离心法V颗粒沉降速度d颗粒直径ρ颗粒密度ρ0介质密度g加速度η介质粘度概念：用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在离心力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。Stoke’s定律：V=d^2（ρ-ρ0）g/18η。分为等密度梯度离心法和速率区带离心法。3.2.1 等密度梯度离心V颗粒沉降速度d颗粒直径ρ颗粒密度ρ0介质密度g加速度η介质粘度应用条件：介质能够自己形成密度梯度且梯度较陡；颗粒密度变化范围包含于介质密度范围原理：颗粒重力浮力平衡结果：颗粒所在位置的介质密度=颗粒自身密度限制：离心力强，时间长，对细胞破坏大应用举例：DNA分离与纯化，内质网提取3.2.2 速率区带离心应用条件：介质能够自己形成密度梯度且梯度平缓；颗粒密度最小值＞介质密度最大值原理：颗粒沉降系数不等结果：颗粒在介质中形成一系列分界清晰的不连续区带，沉降系数大的在下面限制：颗粒大小相近的混合物不适用应用举例：菠菜叶绿体RNA的分离纯化；小鼠干细胞线粒体的分离纯化3 制备型分离技术差速离心密度梯度离心分离原理沉降速度差异沉降速度差异浮力密度差异离心速度由低到高，逐级递增恒定离心时间单次短，反复多次长产物纯度较低高溶液介质无特殊要求自身能够形成密度梯度或人为预制产物分布沉淀中悬浮且形成区带应用病毒、亚细胞结构核酸、蛋白复合体、病毒、亚细胞结构差速离心 vs 密度梯度离心4. 其他进展离心注浆/铸造工艺均匀致密/梯度/层状/多孔等材料离心-SHS技术金属基陶瓷复合材料离心烧结技术具有梯度气孔结构的多孔陶瓷材料新材料：如金纳米粒子的表面清洁；陶瓷材料的制备中药学：制剂制备；品控质检等Preference张敏,王宁,张迎春,顾岩,杜伟. 穿刺液标本差速离心与甩片方法检菌效果观察[J]. 河北医学. 2012,18(01): 71-72蔡静清,张敏,张迎春. 差速离心分离血细胞涂片检菌效果观察[J]. 现代中西医结合杂志. 2010,19(34): 4467-4468刘丽华,马学恩,顾玉芳,赵振华. 应用差速离心法提纯禽脑脊髓炎病毒及电镜观察[J]. 内蒙古工业大学学报(自然科学版). 2005,24(03): 184-186周望展,黄君,况凌云,周晓静,郭能能,吕建新,刘丹慧. 二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体[J]. 中国细胞生物学学报. 2013,35(04): 510-515张正福,纪来升. 密度梯度离心技术在分子生物学研究中的应用[J]. 植物生理学通讯, 1981,(06): 60-64付政祺,杨莹,田青. 蔗糖梯度离心技术方法在提取内质网的应用[J]. 医学理论与实践. 2011,24(17): 2022-2024戚建强,欧阳世翕,黄勇.离心技术在陶瓷材料制备中的应用[