非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用.docVIP

非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用 1 1 材料与方法 3 2 实验结果 4 3 讨论 5 文2：短时受精在体外受精的临床应用 6 1资料与方法 7 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用 文1：非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用 Primary application of in vitro cell research by indirect coculture system ［Abstract］ Objective To study the phenotype change and interactio of mouse bone marrowderived mesenchymal stem cells induced by B16, a mouse malignant melanoma cell line. Methods Indirect coculture was based on trawell system to analyse the phenotype change of MSC. Determination of the expression of Ⅷ facto and CD34 by immunohistochemistry and immunofluorescence. Results MSC was form in polygon and fusiform induced by B16. Then the immunohistochemistry and immunofluorescence staining show Ⅷ facto and CD34 was upregulation of MSC. Conclusion The results of the indirect coculture experiments with B16 cell and MSC in vitro can initially confirm that parts of the MSC traform their phenotype, it mea that indirect coculture system may used in cell interaction research in vitro. ［Key words］ mesenchymal stem cells; malignant melanoma; indirect cocuuture 间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）是指存在于骨髓基质中的非造血组织的另一类重要的干细胞，它最显著的生物学特征是既有自我更新的能力，又具有向多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化的潜能［1,2］。它有着广泛的来源，包括骨髓、骨骼肌、软骨、骨、肌腱等，故在干细胞研究领域中具有突出的优势及非常重要的理论研究意义和临床应用价值。 笔者希望通过进行MSC细胞和恶性黑色素瘤细胞的非接触式共培养，观察不同培养条件下的MSC形态，检测多种指标免疫组织化学染色结果、分析差异，初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的MSC中部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。 1 材料与方法 实验动物 小鼠源性间充质干细胞，天津医科大学病理教研室。小鼠源性恶性黑色素瘤细胞B16细胞系，环湖 医院 细胞室。 主要实验试剂 CD34，兔抗小鼠IgG多克隆抗体，Santa cruz公司，货号SC-9095。Ⅷ因子，兔抗小鼠IgG多克隆抗体，基因公司，货号GA008202。 主要实验器材 倒置相差光学显微镜，Olympus公司。图像采集系统，NikoDell公司。自动控制恒温培养箱，Jouan公司。Trawell， μm孔径，Costar公司。 非接触式共培养体系中B16细胞对MSC细胞的诱导分化作用 MSC细胞与B16细胞非接触式共培养实验 选取MSC细胞和B16细胞，进行细胞计数，配制成浓度为×104个/ml的MSC预培养工作液和浓度为×104个/ml的B16预培养工作液。将1 ml MSC预培养工作液加入对应的Trawell预培养孔中；将 mlB16预培养工作液加入Trawell中的共培养插件中，再将 ml培养基，沿侧壁缓缓注入下层小室，样品编号，预培养24 h后，取出Trawell培养板，将各孔及共培养插件中原有的培养液吸