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SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2、操作（1） 制备分离胶（2） 制备积层胶(堆积胶） 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 分离胶聚合之后 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 （3） 加样品样品的处理 在蛋白溶液中加入过量的SDS后，可引起以下的反应： 蛋白质本身的电荷被屏蔽 氢键断裂 疏水相互作用被取消 多肽被去折叠(二级结构破坏),并形成椭球型 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 一、什么是SDS 十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS) 是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体 （monomer）和分子团（micellae）的混合形 式存在 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 SDS的作用 破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 一、SDS的基本原理 （一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 1、SDS 阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂 断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2、强还原剂 巯基乙醇（β-mercaptoethanal）  二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT） 使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 SDS和还原剂的作用：（1）分子被解聚或组成它们的多肽键（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负  电荷的蛋白质-SDS胶束 （3）蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超  过了蛋白质分子原有的电荷量，消除 了不同分子之间原有的电荷差异 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 蛋白质-SDS胶束的特点（1）形状像一个长椭圆棒（2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS胶束基本上是相同的 （3）长轴的长度则与亚基分子量的大小成正比 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 胶束在SDS系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即蛋白质或亚基分子量的大小。 当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系 2021/3/26 SDSPAGE 原理 步骤 详细介绍 含图片 ppt课件 3、影响SD