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Western Blot 实验技术手册 Western Blot 是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相 载体（杂交膜） 上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在， 从而检测到靶 蛋白在待检测样本中的表达情况。 目前 Western Blot 已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术 之一 . 、 Western Blot 基本操作流程图 细胞/组织蛋白提取 J 蛋白定量、蛋白变性上样 、电泳 一转膜 封闭 孵育一抗 J洗膜 孵育二抗 J洗膜 底物孵育 曝光或显色 二 . Western Blot 操作步骤 WB 结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样蛋白提取 、 WB 结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合 使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样 对于贴壁培养的细胞， 经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂， 然后吸净PBS，加入预冷的裂解液， 最后用细胞刮子刮取贴壁细胞， 将细胞及裂解液温和地 转移至预冷的微量离心管中， 4C离心12,000 rpm,20 min （根据细胞种类不同调整离心力） ， 轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀 . 对于组织样品， 用灭菌的预冷的工具分离目的组织， 尽量置于冰上以防蛋白酶水解