病毒载体-吴小兵.ppt

病毒载体研究进展 基因载体系统 病毒载体系统 非病毒载体系统 腺病毒载体 反转录病毒载体 腺伴随病毒载体 单纯疱疹病毒载体 慢病毒载体 裸DNA DNA-阳离子脂质复合物 DNA-蛋白质复合物 细胞内包装 细胞外包装 DNA-阳离子多聚物 DNA/RNA嵌合物 吴小兵 （‘863’计划生物领域病毒基因载体研发基地） 病毒载体概述（1） 要求：1、携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒 2、介导外源基因转移和表达 3、对机体不致病 容量：自身基因组大小的105%~110% 组成：1、病毒复制和包装元件 2、病毒基因 3、插入的外源基因或元件 4、病毒外壳/外膜 用途：基因转移和表达 1、基因治疗 2、疫苗 3、器官移植 4、组织工程 5、转基因动物 6、基因功能研究 病毒载体概述（2） 优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高； 2、复杂的装配过程由细胞完成； 3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。 常用的病毒载体的特点： 病毒载体研究方向 1、病毒包装系统 2、无病毒基因的病毒载体 6、自我扩增型病毒载体 7、条件增殖型病毒载体 5、嵌合型病毒载体 3、靶向性病毒载体 4、可调控表达的病毒载体 8、新病毒载体 病毒载体包装系统 组成：1、宿主细胞 2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒） 3、被包装的DNA/RNA 包含顺式作用元件 单因素生产系统（one-component system) 双因素生产系统 (two-component system) gag pol env 图1 反转录病毒包装系统示意图 图2 腺病毒包装系统示意图 293 cell E1a,b JM17 Ad Shuttle 293 cell E1a,b 多因素生产系统 (multi-component system) 图3 腺病毒伴随病毒包装系统示意图 Host cell +vector DNA Helper virus +helper plasmid 图4 双因素系统生产重组AAV病毒示意图 proviral cell Recombinant helper virus (rHSV-repcap) 无病毒基因的病毒载体 被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和 包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病 毒的外壳/外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。 腺伴随病毒载体： 反转录病毒载体： 腺病毒载体： 单纯疱疹病毒载体： gene ITR ITR pA 无辅助病毒包装系统 图5 重组AAV无辅毒包装系统 Adenovirus with packaging signal flanked by loxP 图6 mini-adnovirus无辅毒包装系统 靶向性病毒载体 转导靶向性 转录靶向性（特异性） 改造病毒外壳/外膜 连接靶向性结合分子 Modified adenovirus cell 组织特异性启动子 肿瘤选择性启动子 细胞周期调控启动子 肿瘤血管内皮导向启动子 双特异性启动子 病毒增殖的特异性转录调控 可调控表达的病毒载体 细胞的调控元件 病毒的调控元件 人工合成的调控元件 细胞特异性转录 细胞启动子 病毒启动子 albumin MVM P4 Tyrosinase or TRP-1 B19 promoter PSA HBV MBP JCV MCK EBV GFAP NSE KDR/flt-1 AFP CEA erbB2