电泳技术昆明医科大学.pptxVIP

会计学;一、电泳的概念; COO- COO- COOH ╱ + H+ ╱ + H+ ╱ Pr ←————→ Pr ←————→ Pr ╲ + OH- ╲ + OH- ╲ NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PHPI; 而核酸，无论是RNA还是DNA，由于含有丰富的磷酸基团，所以在PH4.0时，带净的负电荷。;2、带电颗粒在电场作用下所受的力： (Charged particles under the action of electric field force);;3.影响电泳速度的因素：(The influencing factors of electrophoresis rate);三、电泳装置Electrophoresis apparatus;电源(power supply);按支持介质种类不同分为： 惰性介质(Inert medium)：起支持作用，减少对流，介质本身不参与电泳分离 纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、硅胶电泳、氢氧化铝电泳 凝胶介质(The gel medium)：起支持作用，减少对流，介质本身参与电泳分离琼脂糖凝??电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 2. 按支持介质形状不同分为: 薄层电泳 、 板电泳 、 柱电泳 ;3. 按电泳槽方向不同分为： 水平电泳、垂直电泳 4. 按用途不同分为： 分析电泳、 制备电泳 5. 按所用电压不同分为： 低压电泳（100V～500V ）、高压电泳（1000V～5000V） 6. 按分离原理不同分为： 移动界面电泳（自由界面电泳）、区带电泳、等速电泳、 等电聚焦电泳、免疫电泳 ;7. 按样品是否经过还原剂处理分为： 还原电泳、非还原电泳 8. 按凝胶介质中是否加入变性剂分为： 变性电泳、非变性电泳 9. 按电泳系统的均一性分为： 连续电泳、不连续电泳 10. 按样品被分离时凝胶介质的pH不同分为： 酸性电泳（pH=4.3）、碱性电泳（pH=8.8）;琼脂糖凝胶电泳 (Agarose gel electrophorsis of DNA);一、琼脂糖凝胶电泳的特点(The characteristics of the agarose gel electrophoresis);分子筛效应（Molecular sieve effect）：分子量或分子大小和形状不同的带电颗粒通过一定孔径的凝胶时，因受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。 电荷效应（Charge effect）：带电颗粒由于所带电荷量不同，而在电泳中表现出不同的迁移率，这就是电荷效应。;第15页/共37页;EB显带（EB banding）; 琼脂糖凝胶电泳由于其所分级分离的生物大分 子比聚丙烯酰胺凝胶电泳大，因此适合于分离核酸 （DNA和RNA）和蛋白。 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Polyacrylamide gel electrophorsis, PAGE); 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂N，N，N?，N?-四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(VB2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。该凝胶具有刚性的凝胶孔，凝胶孔径的大小主要决定于丙烯酰胺的浓度。 ;聚丙烯酰胺凝胶具有如下优点(the advantages of poly propylene ethylene amines gel)： 一定浓度下，凝胶透明，有弹性，机械性能好 化学惰性好，在范围较大的pH、温度和离子强度等条件下稳定；几乎无电渗作用 由于可以制得高纯度的单体原料 ，样品分离重复性较好 样品在凝胶中不易扩散，样品分离灵敏度高，可达10－6g 容易制备出孔径范围很宽的凝胶，以适应不同的需要 无紫外吸收，不染色就可以用于紫外波长的凝胶扫描作定量分析 ;凝胶浓度的选择与被分离物质分子量密切相关 (Gel concentration selection and separation material molecular weight) ;第22页/共37页;第23页/共37页;二、电泳的原理;分子筛效应