发酵饲料中可溶性还原糖和总糖的测定.pdfVIP

河南宏翔生物科技有限公司 河南省多功能生物蛋白工程技术研究中心 编号： HXSW/QC05-2012 通 用 工 艺 修订：第 1 版 第 0 次修改 发酵饲料中可溶性还原糖和总 起草：刘永垒 日期： 2012.09.24 糖的测定 批准： 日期： 1 目的 建立统一的原料、成品、发酵过程中还原糖和总糖的定性检测方法，确保检验方法的一致性、科学性和准确性 2 范围 适用于本公司发酵饲料中还原糖和总糖的检验 3 责任者 品控人员（进货检验员、制程检验员和最终检验员）负责检验 4 正文 4.1 原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基、具有还原性的糖类。黄色的 3,5-二硝基水杨酸（ DNS ）试剂与还原糖在碱性 条件下共热后，自身被还原为棕红色的 3-氨基 -5-硝基水杨酸。在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含 量成正比，在波长为 540nm 处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。 不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。通过对样品中的总糖进行酸水解， 测定水解后还原糖含量，可计算出样品的含量含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水， 所以在计算多糖含量时应乘以系数 0.9。 4.2 仪器和试剂 4.2.1 仪器 分光光度计、电热恒温水浴锅 、试管及试管架 、容量瓶 、移液器 、量筒。 4.2.2 试剂 4.2.2.1 1mg/ml 葡萄糖标准液 准确称取 80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中， 加少量蒸馏水溶解后， 转移到 100ml 容量瓶中， 用蒸馏水定容至 100ml ，混匀， 4 ℃冰箱中保存备用。 4.2.2.2 DNS 试剂（ 3,5-二硝基水杨酸） 将 6.3g DNS 和 262ml 2mol/LNaOH 溶液，加到 500ml 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 重蒸酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000ml ，贮于棕色瓶中， 7-10d 后使用。 4.3 操作步骤 1 发酵饲料中可溶性还原糖和总糖的测定 4.3.1 葡萄糖标准曲线制作 取 9 支具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/ml 的葡萄糖标准液、蒸馏水和 DNS 试剂，配成不同浓 度的葡萄糖反应液。 表 1 葡萄糖标准曲线制作 试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 葡萄糖标准溶液（ mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水（ mL ） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 DNS （mL ） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量（ mg） 0 0