第6章-目的基因克隆.pptVIP

2021/12/7 * DNA诱变 2021/12/7 * DNA诱变 定点突变 随机突变 2021/12/7 * 定点突变 基于PCR的点突变 不依赖于PCR的定点诱变方法 2021/12/7 * 基于PCR的点突变 重叠延伸PCR 法(Over-lap extension PCR ) 大引物PCR (Megaprimer PCR) 特殊位置碱基的定点突变 扩增环状质粒全长的突变方法 2021/12/7 * 重叠延伸PCR 法(Over-lap extension PCR ) 重叠延伸PCR法介导的定点突变原理图 2021/12/7 * 大引物PCR (Megaprimer PCR) 大引物PCR 法流程（图中黑色实心三角形代表突变位点） 2021/12/7 * 特殊位置碱基的定点突变 唯一限制性位点删除法（unique site elimination technique，USE）原理图 （黑色实心三角形代表突变位点，实心椭圆代表酶切位点） 2021/12/7 * PCR 介导定点诱变的优点 ①突变体回收率高 ②在任何位点引入突变 ③降低模板DNA 形成二级结构的能力 ④可利用商业试剂盒 ⑤快速简便 2021/12/7 * PCR 介导定点诱变的缺点 ①PCR 产物有相对高的错误率 ②在扩增DNA 的3’末端引入非预