微生物细胞破碎.pptxVIP

会计学;第2页/共74页;为了研究细胞的破碎，提高其破碎率，有必要了解各种微生物细胞壁的组成和结构（表1）： ;第4页/共74页;第5页/共74页;第6页/共74页;第7页/共74页;第8页/共74页;细菌破碎的主要阻力来自于肽聚糖的网状结构，网状结构越致密，破碎的难度越大，革兰氏阴性细菌网状结构不及革兰氏阳性细菌的坚固； 酵母细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 不同种类的细胞结构差别很大，破碎的难易程度也不同，由难到易的大致排列顺序为：植物细胞＞真菌（如霉菌、酵母菌）＞革兰氏阳性细菌＞革兰氏阴性细菌＞动物细胞。;第10页/共74页;二、常用破碎方法;细胞破碎机理图;进入珠磨机的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂（直径小于1mm）一起快速搅拌或研磨，研磨剂、珠子与细胞之间的互相剪切、碰撞，使细胞破碎，释放出内含物。在珠液分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出从而实现连续操作。破碎中产生的热量一般采用夹套冷却的方式带走。;高速珠磨机;实验室规模的细胞破碎设备有Mickle高速组织捣碎机、 Braun匀浆器； 中试规模的细胞破碎可采用胶质磨处理； 在工业规模中，可采用高速珠磨机（瑞士WAB公司和德国西门子机械公司制造）。;胶体磨;第17页/共74页;破碎作用方程;操作条件的选择：;第20页/共74页;第21页/共74页;第22页/共74页;第23页/共74页;珠磨法的破碎率一般控制在80%以下： 降低能耗 减少大分子目的产物的失活 减少由于高破碎率产生的细胞小碎片不易分离而给后续操作带来的困难。;采用高压匀浆器（由高压泵和匀浆阀组成，英国APV公司和美国 Microfluidics公司均有产品出售）。;高压匀浆器;第27页/共74页;大、中、小型高压匀浆器;破碎的动力学方程为：ln[1／（l－R）]＝KNPα 其中 R——破碎率； K——与温度有关的速度常数； P一操作压力； N一悬浮液通过匀浆器阀的次数。 α——与微生物种类有关的常数； 破碎酵母菌,α值可取2. 2。可见，影响破碎的主要因素是???力、温度和通过匀浆器阀的次数。 ;第30页/共74页;第31页/共74页;在工业规模的细胞破碎中，对于酵母等难破碎的及高浓度的细胞，常采用多次循环的操作方法。 一般说来，酵母菌较细菌难破碎，处于静止状态的细胞较处于快速生长状态的细胞难破碎，在复合培养基上培养的细胞比在简单合成培养基上培养的细胞较难破碎。 ;思考问题： 比较高压匀浆法与珠磨法的异同点？;第34页/共74页;3.喷雾撞击破碎; 细胞悬浮液以喷雾状高速冻结（每分钟数千摄氏度），形成粒径小于5微米的微粒子。高速载气，氮气流速300m/s，将冻结的微粒子送入破碎室，高速冲向撞击板，得以破碎。 ;喷雾撞击特点： （1）细胞破碎仅发生在与撞击板撞击的一瞬，细胞破碎度均匀，可避免细胞反复受力发生过度破碎现象。 （2）细胞破碎程度可通过无极调节载气压力（流速）控制，避免胞内结构的破坏，适用于细胞器（叶绿体、线粒体）的回收。; 喷雾撞击适用于微生物细胞和植物细胞的破碎，通常处理悬浮液质量控制浓度为100-200g/L。实验室规模的撞击破碎器间歇处理能力为50-500mL/h，而工业规模的处理能力为10L/h。与其他机械法一样，此种破碎方法也会造成操作系统的温度上升，破坏生物产品的生物活性，单程操作使温度大约上升10摄氏度。因此，操作系统中必须设有冷却系统，以保证生物产品的活性。;利用发射15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。 一般认为超声波破碎的机理是：在超声波作用下液体发生空化作用，空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 ;第40页/共74页;超声波破碎法;3.超声破碎法（Ultrasonication）;第43页/共74页;与破碎效率直接相关的参数;珠粒的体积和直径，对于刚性细胞的粉碎常添加细小的珠粒以产生辅助研磨效应。 探头的形状和材质，一般是钛金属材料。 细胞悬浮液的流速。 由于其局限性，在工业上一般不采用，主要是用于实验室规模的细胞破碎。;影响超声对生物产品的回收有很多因素 （1）温度 避免方法 预冷 冷凝循环水 （2）游离基的生成等化学效应. 应对方式 添加游离基的清除剂{胱氨酸，谷胱甘肽或者利用氢 气顶吹细胞悬浮液来缓和};微波破碎;机械破碎作用机制不同，有