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猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法
猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法
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猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法
猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法
字体:大 中 小??2009-9-1??来源:省林检局??阅读: 160 次??[关 闭]
1 主题内容及应检范围
本办法规定了猕猴桃细菌性溃疡病菌Pseudomonas syringae pv. actinidiae Takikawa et al. 的检疫检验及检疫处理操作办法。
本办法适用于林业植物检疫机构对猕猴桃属Actinidia spp.植物活体、残体的检疫检验和检疫处理。
2 产地检疫
种苗繁育基地的建立
培育的猕猴桃,应从无病区采集接穗,或用无病虫的当年生半木质枝条作插条。
加强晚秋水、肥管理,避免在强风和冬季低温的高海拔区,即易发生霜冻的地方建园。
踏查
在种苗繁育基地、猕猴桃栽植地的果园、林场,以自然界线、道路等为单位进行线路(目测)踏查。
调查寄主的主干及分枝上部是否有淡黄色或黄褐色病斑;病斑处是否有小孔,从中向外流出白色或铁锈色液体,病部下方形成深褐色污斑。
调查枝条上是否有暗绿色或暗褐色水渍状纵向、线形龟裂;新梢是否呈暗褐色萎蔫枯死,病部浸出白色水渍状液体。
调查叶片上是否有红色小点,或大小为2–3 mm的褐色多角形病斑,周围有明显黄色水渍状晕圈,叶片向里或向外翻卷。
确认有疫情需进一步掌握危害情况的,需设标准地(或样方)做详细调查。
标准地(或样方)调查
种苗繁育基地样方设置与调查
样方的累积面积应不少于调查总面积的5%。
每块样方面积为 hm2,采取棋盘式取样法,抽取样树5–10株,进行病害分级调查。
果园标准地设置与调查
按果园面积设置,10 hm2以下(含10 hm2)设1块,每增加5 hm2增设1块。
每块标准地面积为 hm2,采取棋盘式取样法,抽取样树10株,进行病害分级调查。
病害分级标准
单株病害分级标准
Ⅰ级 全株叶、蔓无病 代表值0;
Ⅱ级 1–20片叶和1个侧蔓发病,或1/3以下的新梢发病 代表值1;
Ⅲ级 21–30片叶和2–3个侧蔓发病,或1/3–1/2的新梢发病 代表值2;
Ⅳ级 31片以上叶和1–2个主蔓发病,或1/2以上新梢发病 代表值3;
Ⅴ级 主干发病1/3,或多数侧蔓发病、植株部分枯死 代表值4;
Ⅵ级 主干发病1/3,或全部主蔓枯死发病、全株枯死 代表值5。
果园病害分级标准(以被害株率为标准)
轻 被害株率 10%以下;
中 被害株率 11%–30%;
重 被害株率 31%以上。
所采集的感病材料应包含植物的所有部分和各种症状部分。应尽可能采集感病初期的病株部分,以利于病原细菌的分离。
样品置于聚乙烯袋内或其它合适容器内保鲜和防止污染。样品应冷藏存放,避免受到阳光的照射。
3 调运检疫
抽样比例
苗木100株以内(含100株)的应全部检查;100–1000株按10 %抽取;1000株以上按一批货物总件数(株)的5 %抽取。
植株及植株残体应全部进行检查。
抽样方法
苗木按照抽样比例,采取分层方式设5个样点进行抽样。
对携带有病症的植株及植株残体应全部进行检查。
现场检验
检查寄主的叶片是否向里或向外翻卷,并有红色小点或多角形病斑,周围有明显黄色水渍状晕圈。
检查1–2 a枝条上是否有水渍状纵向、线形龟裂,新梢是否萎蔫枯死,并有白色水渍状液体溢出。
检查寄主干部是否在病斑下方呈深褐色并有铁锈色液体溢出。
4 检疫检验
溢菌检验 在具典型症状的病部上,取病健交界处的一小块病组织,在显微镜下切片检查是否有大量细菌液溢出。
分离培养检验
取小块病斑组织,经表面消毒,灭菌水洗3次后,研碎静置10 min,采用假单孢属选择性培养基进行分离,将分离并经纯化后的细菌移植到BPA培养基斜面上培养48 h,置8 ℃冰箱保存。分离鉴定方法见附录1。
检查在BPA培养基平板上是否形成污白色、圆形、全缘、凸起、光滑、直径约为1–3 mm的菌落;在KBA培养基上未见荧光;在Luisetti培养基上发生蓝色荧光及在SPA培养基上呈粘液状菌落。
染色检验
鞭毛染色 采用西萨—基尔染色法。经染媒5–7 min→水洗干燥→苯酚品红染色5 min→水洗干燥后镜检。
显微镜下菌体和鞭毛为阴性反应,呈红色,极生1–3根。
革兰氏染色 采用结晶紫草酸胺染色法。经固定涂片→染色1 min→水洗数秒吸干→碘液处
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