细胞凋亡和细胞坏死.pptxVIP

会计学;危难中的细胞啊， 你沉稳不乱， DNA片片切割， 化云梯直通天堂； 细胞体分团相聚， 把生命的凝重浓集在小体上； 分别了朝夕相处的伙伴， 再见了快乐美好的时光； 这一切的一切又融入临近的胞体， 腾出的空间再写生命的篇章。 ;细胞死亡形式;第4页/共44页; 坏死 凋亡;细胞凋亡的生理和病理意义;细胞凋亡与疾病发生机制的新认识;细胞凋亡的过程;凋亡过程及分??诱导期 执行期 消亡期 ;凋亡时细胞的主要变化;;;胸腺细胞;胸腺细胞;细胞凋亡的生化改变;1.DNA的片段化“梯”状条 带为细胞凋亡主要特征;第17页/共44页;2.内源性核酸内切酶激活及其作用;3. Caspase 9 激活，需要通过CARD（caspase-recruitment domain)、Apaf-1、细胞色素c、ATP等多个因子的参与;细胞凋亡的调控;1.细胞凋亡的诱导因素;2.细胞凋亡的抑制因素;(二)细胞凋亡信号的转导 -凋亡信号转导系统特点;㈡细胞凋亡信号的转导;㈢ 细胞凋亡相关基因;Bcl-2抗凋亡机制;细胞凋亡发生机制;（一）氧化损伤机制;（二）钙稳态失衡引起细  胞凋亡的可能机制;细胞凋亡的生物学意义;第31页/共44页;细胞凋亡的检测;一．细胞凋亡的形态学分析;细胞凋亡的形态学检测方法;二. DNA降解分析; ;(二)原位标记法 TUNEL(TdT mediated dUTP nick end labeling)终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记技术。 原理：在TdT的作用下，带有标记物的dUTP被连接在断裂DNA3’末端，然后通过相应的方法检测标记物，从而判断是否有凋亡发生。 应用范围：石蜡包埋的组织切片、冰冻组织切片、培养细胞、组织中分离的细胞 ;(三) ELISA法 原理：以抗组蛋白抗体包被微孔板壁，加入标本，凋亡细胞的核小体可与抗体结合，再加入抗-DNA片断-POD复合物，与核小体中的DNA片断结合，最后加入POD显色底物，以酶标仪测定光密度以进行定量分析。;三. 凋亡酶学分析;Caspases的检测 1. Caspase-3活性测定(FIENA法) 荧光测定免疫吸附法(flurometric immunosorbent enzyme assay, FIENA), caspase-3可作用于连接荧光素的特异底物－乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酰胺(Ac-DEVD), 产生发荧光的裂解产物AFC，且caspase-3活性与Ac-DEVD-AFC分解的量或自由荧光AFC产生荧光的强弱成正比，故可定量检测 2. 蛋白印迹法 Caspases作用底物的检测 PARP89kD的检测;四. 凋亡相关蛋白分析;五、流式细胞分析;FCM分析细胞凋亡的方法;感谢您的观看！