男科生殖实验室基础PPT课件.ppt

2.精子活体染色 意义 用于评价人类精液中精子的成活率，鉴别不活 动精子的膜结构和功能的完整性。 方法学 伊红法 伊红-苯胺黑染色 低渗膨胀法  3.精子成熟度检测指标 精子核蛋白染色 精子DNA碎片检测（精子染色质扩散法） 精子-透明质酸结合试验（固相捕获法） 精子核蛋白染色 核蛋白组型转换缺陷或异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产 精子核蛋白成熟度染色：成熟精子（M）染粉红色，不成熟精子（IM）染蓝紫色 精子DNA碎片检测（精子染色质扩散法） 不育、自发流产、胚胎停育病因分析 妊娠结局的预测 辅助生殖助孕方式的选择 精子DNA碎片检测（→：存在DNA碎片精子） 精子-透明质酸结合试验（固相捕获法） 临床意义 精子成熟度指标 可反映精子的受精能力 精子多重质量指标 以上三项是反应精子成熟度的指标，三者有微弱的相关性，但不能互相替代 4.精子受精功能检测指标 精子酪氨酸磷酸化检测 诱发精子顶体反应 精子顶体酶活性定量检测 精子酪氨酸磷酸化检测（荧光染色法） 临床意义： 酪氨酸磷酸化（TP）发生在精子获能期间。 TP是反映精子-卵透明带结合能力的指标。 帮助临床决策是使用IVF还是ICSI治疗。 TP识别：精子中尾部明显增粗且呈明亮的黄绿色荧光 诱发精子顶体反应（钙离子载体诱发荧光染色法） 精子体外获能后，通过钙离子载体启动顶体反应，用于评价 精子发生顶体反应的能力。 临床意义： 图A 图B 图A 图B 未发生顶体反应的精子特征：头部顶体区发荧光（如图A）。发生顶体反应 的精子特征：头部仅赤道板发荧光（如图B），或者所有的顶体区均无荧光。 精子顶体酶活性定量检测（固相BAPNA法） 顶体酶是受精过程中不可缺少的蛋白水解酶。 顶体酶活力不足可导致不育。 临床精子成活率低、死精子症以及严重生殖系统感染，可造成精子顶体酶活性降低。 顶体酶活性是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标。 临床意义： 固相BAPNA法检测精子顶体酶示意图 （a:将固着有精子的装置与反应管接合；b:翻转反应板，精子与反应液接触，反应启动；c:再次翻转反应板，精子与反应液分离，反应终止。→:精子，→:反应液） (a) (b) (c) 5.男性免疫性不育检测指标 精子膜表面抗体IgG检测(WHO推荐） 男性免疫性不育的确证需要在MAR阳性基 础上附加其他试验，附加试验可以是前者的重复试验、精子-宫颈粘液接触试验、精子-宫颈粘液毛细管试验。 五.病例分析 男性不育病因实验分析总体思路 a) 精子从发生到精卵结合是一个漫长而复杂的过程，其中任何一个环节出现问题均可导致不育。 以精液常规分析、病史和一般体检作为分析导线，可以 有针对性地缩小分析的范围，依此指引进一步分析的方向。 b) 将不育患者按精液的状况分类有利于从实验学的角度进行病因分析： 少精子症 弱精子症 无精子症 畸精子症 低精液量 液化异常 精液常规无明显异常 组项分析内容 （参考) Ａ. 无精子症组项分析 精液沉渣镜检 精浆果糖 精浆中性α- 葡糖苷酶 精液感染性检测(弹性蛋白酶) 抑制素B/血激素 染色体、基因 Ｂ. 少精子症组项分析 CASA 精液感染性检测(过氧化物酶染色/ 弹性蛋白酶） 抑制素B/血激素 精液细胞形态 精浆果糖 中性α-葡糖苷酶 Ｃ. 弱精子症组项分析 CASA MAR (高活力精子提取) 精液感染性检测 精子形态学快速染色 精液细胞形态 精子低渗膨胀试验 精液LDH-X D. 精液量少组项分析 CASA 精浆果糖 中性α-葡糖苷酶 射精后即时尿液沉渣镜检/尿果糖 感染性检测 血激素 E.精液液化异常组项分析 CASA 精液感染性检测 精浆锌 精浆柠檬酸 精浆酸性磷酸酶 F.精液常规正常不育分析 精子形态学染色 钙离子诱发顶体反应 顶体酶活性定量检测 活能精子酪氨酸磷酸化试验 精液与宫颈粘液相互作用 G.自发性流产/胚胎停育组项分析 CASA 精子核蛋白组型转换 精子-透明质酸结合试验 DNA碎片检测 精液感染性检测 精子形态学染色 病例 1 某男，33岁，多次检测无精子，低精液量。体检：第二性征正常，双侧睾丸、阴茎、附睾、输精管均无明显异常。染色体核型分析未发现异常, 血激素检测正常, 2003年5月12日检测精液检测结果如下： 精液量: