链霉素诱变育种的方案.pptVIP

与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体 野生型菌株wild type strain 原始菌株 营养缺陷型auxotroph 人工诱变或自然突变 原养型菌株prototroph 回复突变或重组变异 三、营养缺陷型菌株的筛选 第30页，共56页，编辑于2022年，星期三 与筛选营养缺陷型有关三类培养基 (1)基本培养基MM (2)完全培养基CM (3)补充培养基SM 第31页，共56页，编辑于2022年，星期三 突变株的表型 检出方法 营养缺陷型 补充培养基 （auxotroph） 抗性突变型 药物培养基 （resistant mutant） 条件致死型 培养条件改变 （conditional lethal mutant） 基因突变的类型 第32页，共56页，编辑于2022年，星期三 诱发突变 淘汰野生型菌株 检出缺陷性 鉴别缺陷性 营养缺陷性菌株的分离和筛选 第33页，共56页，编辑于2022年，星期三 选择合适的诱变剂与诱变方法 诱变剂和诱变方法都要简便有效 主要的诱变剂亚硝基胍,紫外线,亚硝酸 诱变方法 物理方法 化学方法 注意突变率还与诱变剂量有关 （一）、营养缺陷性的诱变 第34页，共56页，编辑于2022年，星期三 1.抗生素法 青霉素法（细菌） 作用于细菌细胞壁的主要成分肽聚糖 制霉菌法（酵母菌） 作用于真菌细胞膜上的甾醇 （二）、淘汰野生型菌株 第35页，共56页，编辑于2022年，星期三 2.菌丝过滤法 适用于真菌和放线菌 作用于丝状菌的孢子 3.高温杀菌法 适用于芽孢菌类 作用于芽孢菌类的芽孢和营养体 第36页，共56页，编辑于2022年，星期三 （三）、检出营养缺陷型 ①夹层培养法 ② 限量补充培养法 ③ 影印接种法 ④ 逐个检出法 第37页，共56页，编辑于2022年，星期三 1.夹层培养法（延迟补给法） 第38页，共56页，编辑于2022年，星期三 2.限量补充培养法 第39页，共56页，编辑于2022年，星期三 3.影印接种法 第40页，共56页，编辑于2022年，星期三 关于链霉素诱变育种的方案 第1页，共56页，编辑于2022年，星期三 元芳!此事你怎么看? 第2页，共56页，编辑于2022年，星期三 看目录 一、诱发突变 （一）、出发菌株选择 （二）、诱变剂及诱变剂量的选择 （三）、影响诱变效果的因素 （四）、平板分离 二、突变株的筛选 （一）、初筛 （二）、复筛 （三）、产物活性测定 三、营养缺陷型菌株的筛选 四、高产变株最佳环境条件的调整 第3页，共56页，编辑于2022年，星期三 插曲(很有必要) 诱变育种的一般程序如下： 出发菌株----菌种纯化(出发菌株性能测定)----制备斜面孢子----制备单孢子悬液(悬液进行活菌计数)----诱变剂处理(存活菌数的测定并计算存活率)----平板分离(测定变异率)----挑取变异菌落并移植至斜面上----初筛(初筛数据分析，生产性状的粗测)----斜面传代----复筛(复筛数据分析，精确测定生产性状)----变异菌株(菌株参数分析)----小型或中型投产试验----大型投产试验。 第4页，共56页，编辑于2022年，星期三 （一）、出发菌株的选择 选择从自然界(土壤）中分离链霉菌 放线菌是产生抗生素活性最大的一类微生物，迄今已在工业、医学、农业上都有利用抗生素成功的实例，而链霉菌又是放线菌中抗生素的主要产生菌，具有广泛的物种多样性和代谢多样性，是重要的资源微生物，但在链霉菌中普遍存在遗传不稳定性，而引起抗生素产量下降。 因此,我们要研究提高抗生素产量的方法，已期获得更大产量的抗生素，而提高产量的最重要途径是通过育种改变生产菌种。诱变育种是一种简便易行而且快速的选育方法，因而在抗生素的菌种筛选中应用最广泛。 一、诱发突变 第5页，共56页，编辑于2022年，星期三 菌种的纯化： 1、土壤用无菌水浸泡，静置取上清 2、做梯度——上清分别稀释10倍、100倍、1000倍等等 3、使用链霉菌优势培养基（在上边链霉菌比其他菌长的快），用步骤2的各个梯度液体分别铺板。 4、按照链霉菌最适生长温度培养。 5、选取菌落数在100个左右，菌落清晰无重叠的平板。 6、根据伯杰氏菌种鉴定手册中链霉菌的菌落外观介绍，粗选出基本符合的链霉菌。 7、挑取选出的菌落摇瓶培养，