BCA测蛋白的具体操作步骤.docxVIP

不得用于商业用途 不得用于商业用途 仅供个人参考 Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse 原理BCA蛋白浓度测定试剂盒（BCAProteinAssayKit）是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和 高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积 为1?20微升。 试剂盒组份组份Cat:KGPBCA（250assay酶标板/50assay1mL比色杯）蛋白标准溶液（0.5卩g/0L5mLBCA试齐UA25mLX2BCA试齐UB1mL 操作步骤 A.酶标板操作 1.标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔白标准溶 液（uL01248121620去离子水（2019181612840对应蛋白含量（yg00.5 1.02.04.06.08.010.0 孔号 0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白质 溶液 （yL 0 1 2 4 8 12 16 20 .J、― 厶IAIJ 水（yL 20 19 18 16 12 8 4 0 相应蛋白质含量（yg 0 0.5 1 2 4 6 8 10 2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀； 各孔加入200卩LBC工作液； 把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37C放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以 蛋白含量（yg为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线； 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20yL加入BCA工作液200□，充 分混匀，37C放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值； 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（yg,除以样品稀释 液总体积（20y）乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：yg/讥 B.分光光度计测定 标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂孔白标准溶液（yL0 51020406080100去离子水（yL1009590806040200对应蛋白含量（yg02.55.010.020.030.040.050.0 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀； 各管加入1000yLBC工作液； 各管充分混匀，37C放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（yg为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线； 稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100y,加入BCA工作液1000yL 充分混匀，37C放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值； 仅供个人参考 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（yg,除以样品稀 释液总体积（100uL，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：卩g/QL 四.注意事项 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60C放置30分钟。BCA法测定 蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如 果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。 3?待测样品浓度在50?2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的SDS,5%的TritonX-100,5%的Tween20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA二硫苏糖醇低于1mM,3■巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 操作时要带手套。 五、储存 BCA试剂A和BCA试剂B室温保存，蛋白标准液-20C冻存。 仅供个人参考 仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途 Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse. Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden. Pourletudeetlarechercheuniquementadesfinspersonnelles;pasadesfinscommerciales. to员bkog^A.nrogeHKOTOpMeno^b3ymoiflCH6yHeHuac^egoBuHHuefigo^^HM ucno员B30BaTbCEbKOMMepqeckuxqe员ex. 以下无正文