实验生化试验km.pptxVIP

实验十四 底物浓度对酶促反应速度的影响——Km值的测定 ? 一、实验目的1．了解底物浓度对酶促反应速度的影响。2．学习测定米氏常数的原理和方法。二、实验原理酶促反应动力学研究各种因素对酶促反应速度的影响。影响因素包括有酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。研究前提单底物、单产物反应酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度底物浓度对反应速度的影响　矩形双曲线（一）米－曼氏方程式中间产物学说 k1k3E + SESE + Pk2 ※1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。Vmax[S] Ｖ＝ Km + [S] 米－曼氏方程式推导基于两个假设：①反应刚刚开始，产物的生成量极少，逆反应可不予考虑。②［S］超过［E］，［S］的变化可忽略不计。Km与Vmax的意义1. Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。当v=Vmax/2时VVmax Vmax[S] Vmax＝2Km + [S]Vmax/2Km＝[S] [S]Km 2. 　Km可近似表示酶对底物的亲和力；当K2 K3时， Km ≈ Ks3.　Km是酶的特征性常数之一4. Vmax定义：Vm