WI-03-35溶血性链球菌的试验方法.docxVIP

恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-35 版号 A.0 溶血性链球菌的测定方法 页次 1/2 生效日期 2020/01/02 目的 制订溶血性链球茵的测定方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按测定方法操作。 适用范围： 本方法适用于溶血性链球茵的测定。 职责 质检部对本测定方法实施负责。 程序 4.1仪器 电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化培养箱、显微镜 4.2器具 烧杯（250ml）、量筒（100ml）.三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶寒、白金耳、酒精灯、培养皿（4）90mm）、刻度吸管（1m1,5m1,20ml） 4.3培养基、菌种： 葡萄糖肉汤、血琼脂平板、草酸钾血浆、草酸钾、氯化钙、血平板、染色液（革兰氏染色用） 4.4器具灭茵： 与样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内12VC20分钟高压灭茵，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160C2小时干热灭菌。 4.5操作步骤 5操作步骤 取样液5mL加入到50mL葡萄糖肉汤，35°C±2°C培养24h。 将培养物划线接种血琼脂平板，35°C±2C培养24h观察菌落特征。溶血性链球茵在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表而光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。 挑取典型茵落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验： 链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL（0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液），加入0.8mL灭茵生理盐水，混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL和0.25%氯化钙0.25mL,混匀，放35°C±2°C水浴中，2min观 恩施金凰新材料有限公司 文件编号 WI-03-35 版号 A.0 溶血性链球菌的测定方法 页次 5/2 生效日期 2020/01/02 察一次（一般10min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h观察，如凝块全部溶化为阳性，24h仍不溶化为阴性。 杆茵肽敏感试验：将被检前菌液涂于血平板上，用灭前银子取每片含0.04单位杆茵肽的纸片放在平板表而上，同时以已知阳性茵株作对照，在35°C±2°C下放置18?24h,有抑菌带者为阳性。 6结果报告 镜检革兰氏阳性链状排列球函，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆茵肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌 7.记录保存： 品管部保管5年。 相关操作规程 电热鼓风干燥箱操作规程 2.HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程 生化培养箱操作规程 YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程 净化工作台操作规程 相关记录 11.1.生物性能检测记录。 编制：审核： 日期：日期： 批准: 日期：