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关于T细胞免疫功能检测平台的建立和在感染性疾病中的应用 t细胞免疫功能检测平台的建立和在感染性疾病中的应用 李泰生 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院感染内科北京100730 通讯作者：李泰生，电邮：litsh@263.net 细胞免疫功能在人体抗感染中发挥重要作用，各种感染性疾病的转归与细胞免疫功能密切相关，尤其是与t淋巴细胞功能的关系更加密切。临床上缺乏体内直接检测t细胞功能的手段，主要靠体外间接的方法来评估。如检测外周血中t淋巴细胞及各亚群数量和比例、增殖功能及产生细胞因子的能力，主要方法有酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbentassay，elisa）、酶联免疫斑点试验（enzyme-linkedimmunospotassay，elispot）、流式细胞术（flowcytometry，fcm），其中fcm鉴于其独特的优势在感染性疾病中应用广泛。 在世界范围内，FCM已被用于检测T和B细胞亚群，以评估免疫功能，并指导临床医生诊断和治疗传染病。例如，最早在法国巴黎学习的piti-salp-salp tri-re医院在临床实践中进行了常规临床试验，以检测淋巴细胞亚群和淋巴细胞增殖功能，帮助指导传染病的诊断和治疗。到目前为止，中国只有少数几家医院进行了辅助性T细胞和抑制性T细胞的最基本检测，这与世界上的检测结果相去甚远。 我们协和医院感染科在1999年率先在国内建立了用fcm检测t、b淋巴细胞亚群的平台，并于2001年开始应用于临床，先后对人类免疫缺陷病毒感染/获得性免疫缺陷综合症（humanimmunodeficiencyvirusesinfection/acquiredimmunodeficiencysyndrome，hiv感染/艾滋病（aids））、病毒性肝炎、严重急性呼吸综合征（severeacuterespiratorysyndrome，sars）等常见或新发传染病进行了一系列的研究，现介绍如下： 一、 FCM简介 fcm是20世纪70年代发展起来的一种测量悬浮在液体中的细胞、细胞器、染色体或其他微粒的各种物理、化学、生物学、免疫学或遗传学等特性的动态分析技术，以每秒数百、数千个细胞的速率进行多参数定性或定量分析[1]。应用fcm可测量细胞大小、dna/rna含量、细胞表面抗原表达等多种参数，是细胞分析和分选的有力工具，其功能包括：细胞表型分析、dna含量及细胞周期分析、细胞内及核膜成分分析、细胞分选、自身抗体检测等[2]。在临床医学中可广泛应用于肿瘤学、血液病、感染性疾病、免疫缺陷病、自身免疫病等多种疾病的诊治。近年来fcm发展迅速，多色流式细胞术（polychromaticflowcytometry,pfc）由5色（20世纪90年代），发展到13色（2001年），甚至18色（2021年）的先进pfc[3]。目前临床上应用最广的是对t淋巴细胞及其亚群测定，较新的还有测定t淋巴细胞特异性胞内细胞因子、结合荧光染料标记测定淋巴细胞增殖能力等。二、t淋巴细胞各亚群简介及意义 FCM可以根据不同的淋巴细胞表面标记物检测不同亚群细胞的数量和比例，包括T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）、NK细胞（CD16+CD56+）。其中，T淋巴细胞可进一步确定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯亚群（CD4+CD45RA+/CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/CD4+CD45RO+）、功能亚群 群（cd28+）、激活亚群（cd38+、hla-dr+）、凋亡亚群（cd95+）等[2]。 T淋巴细胞主要反映细胞免疫功能状态，不同亚群具有不同的临床意义。CD4+T纯亚群在特异性抗原刺激下可转化为记忆亚群。当它们再次暴露于同一抗原时，它们可以迅速参与对特定抗原的有效免疫反应。根据天真/记忆的比例，可以进一步揭示疾病对CD4+T细胞的影响。CD28是T细胞正常激活所必需的共刺激分子受体。缺乏CD28的CD4+T细胞不能完成正常的免疫功能。因此，CD28的表达率可以用来衡量CD4+T细胞的功能。CD38和HLA-DR是T细胞活化的分子标志物，活化亚群可用于评价细胞的免疫活化状态。CD95（Fas受体）是介导细胞凋亡的主要受体之一。凋亡亚群可以评价细胞凋亡。 三、我科关于t淋巴细胞亚群检测平台的建立和在感染性疾病中的应用 T淋巴细胞亚群受生态环境、社会经济等多种因素的影响。不同地区和种族之间存在差异[4]。我们部门于2002年初建立了中国中青年健康人T细胞亚群的参考范围[5]，然后研究了不同年