维生素B12含量的测定（实训案例）.docVIP

维生素B12含量的测定（实训案例） 以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素B12含量的方法。 2.1.紫外分光光度法的测定原理 维生素B12在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。 2.2仪器与试剂 752N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。 3．维生素B12注射液含量测定步骤 准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。然后将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。 4.结果记录与计算 4.1数据记录 将所测数据填入下表。 6-2数据记录表 测定次数 测定次数 测定内容 1 2 3 样品质量(VB12注射液的标示量)，mg/mL 待测溶液的吸光度，A 比色皿的矫正值（吸光度），A0 供试样品的稀释倍数，D VB12注射液中维生素B12的含量，mg/mL V维生素B12的平均含量，mg/mL 4.2.结果计算 样品中的维生素B12注射液含量按下式计算。 计算公式： 式中 VB12---样品中维生素B12的含量，mg/mL A-----待测溶液的吸光度； A0-----比色皿的矫正值（吸光度）； D-----供试样品的稀释倍数； W-----样品质量(VB12注射液的标示量)，mg/mL ---吸收系数为207 五、注意事项 1. 测定过程需避光操作。 2. 在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差?T应不大于0.5%。 3. 维生素B12在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，在pH值4.5～5.0弱酸条件下相对稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。 4. 为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。 5. 比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。过满溶液可能溢出，使仪器受损。使用后应立即取出比色皿，并用自来水及蒸馏水洗净，倒立晾干。 6. 比色皿一般用水荡洗，如被有机物污染，宜用HCl－乙醇(1+2)浸泡片刻，再用水冲洗，不能用碱液或强氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免损伤比色皿。 7. λ＜350nm时使用氢灯，λ＞350nm时使用钨灯。仪器在不测定时，应随时打开暗箱盖，以保护光电管。 六、思考题 1．维生素B12测定时为什么要特别注意在避光的条件下进行? 2.分组讨论维生素B12的性质与其鉴别和含量测定的关系。 知识链接 维生素B12 (vitamin B12)，又称钴胺素，是含钴的维生素，辅酶形式是钴胺酰胺。维生素B12为浅红色的针状结晶，无臭，无味；吸湿性强；易溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸条件下最稳定，强酸（pH2）或碱性溶液中易分解，遇热可有一定程度破坏，但短时间的高温消毒损失小，遇强光或紫外线易被破坏。普通烹调过程损失量约30%；自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12是需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的惟一的一种维生素。胃肠道对其吸收不良将引起恶性贫血。维生素B12在肠道内停留时间长，大约需要三小时（大多数水溶性维生素只需要几秒钟）才能被吸收。有的人由于肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。维生素B12广泛存在于动物食品中，而且其形态无法被人体吸收；植物中的大豆以及一些草药也含有B12，肠道细菌可以合成，故一般情况下不缺乏。维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血；防止大脑神经受到破坏。此外，维生素B12也是唯一含必须矿物质的维生素，因含钴而呈红色，又称红色维生素，是少数有色的维生素。维生素B12虽属B群维生素，却能贮藏在肝脏，用尽贮藏量后，经过半年以上才会出现缺乏症状。人体维生素B12需要量极少，只要饮食正常，就不会缺乏。