第六章：以大肠杆菌为宿主的克隆载体.pptVIP

6.2 6.2 基于M13 噬菌体的克隆载体 噬菌体的DNA分子携带较多的复制必须的基因，包括噬菌体蛋白质衣壳组成部分和噬菌体专性复制酶的基因。如果这些基因中的任何一个改变或缺失，就防碍或破坏噬菌体DNA分子的复制能力。因此，噬菌体的DNA分子可被改变的余地就很小（噬菌体克隆载体一般与原始的噬菌体分子的区别就很小）。 正常的M13基因组为6.4kb长，仅10个相邻的基因就占了大部分（图6-6），这些基因对噬菌体的复制是必不可少的，不能被破坏。M13只在一个507个核苷酸长的序列中可以插入新的DNA，并且在这个区域里，还有一个复制起点（ori），它本身也必须完整存在不能被破坏。因此，改变M13基因组的可能性是有限的。 可插入DNA片段的区域 6.2.1 M13mp2克隆载体的构建 尽管M13基因组被改变的可能性是有限的，但通过对M13进行改造，人们仍得到了一些基于M13建造的载体。M13克隆载体的第一步就是将LacZ`-基因插入到基因间的序列中。这样就产生了M13mp1，它在X-gal琼脂糖板上形成蓝色噬菌斑，M13mp1在LacZ`-基因中没有限制性切点，因此M13mp1不能用于基因克隆操作，但M13mp1载体中，在LacZ`基因的起始点附近有6个核苷酸GGATTC，通过交换其中的一个就变成了GAATTC，刚好就是Ec