生物化学实验课件-生物化学实验5.pptVIP

实验五纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 学习纸层析法的基本原理和操作技术 了解转氨酶的转氨基作用 实验目的：????? 思考题： 1、氨基酸体内代谢的途径？ 脱氨基作用。主要方式：氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基及非氧化脱氨基。 2、什么是转氨基作用？ 指在转氨酶的催化下，氨基酸的 α-氨基与α-酮酸的α酮基的互换反应。 3、各种转氨酶中，那两种活性较高？ 4、谷丙转氨酶和谷草转氨酶在什么情况下发生异常变化 ？ 它们的临床意义是什么？ 实验原理： 1、转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α-氨基转移到另一α-酮基上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的谷丙转氨酶（Glutamic??Pyruvic??Transaminase?,GPT）活性较高，它催化如下反应： ? α-酮戊二酸?+?丙氨酸? ? 谷氨酸? +??丙酮酸 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，在肝细胞的谷丙转氨酶催化下产生丙氨酸，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明组织内的转氨基作用。 2、纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，能吸收20~22%的水。而且其中6~7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，在一般情况下很难脱去，而滤纸纤维与有机