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得到发光大肠杆菌的实验设计 20 艾珉吉 pEGFP-N3 载体为真核细胞表达载体。主要有以下几个部分 载体质粒 PET-28a 目的基因质粒(绿色荧光蛋白) 质粒重组 PET-28a-GFP 将重组质粒导入大肠杆菌体内检测目的基因是否表达成功 一、实验所用质粒 pEGFP-N3 质粒编码野生型 GFP 的红移(荧光波长较大)变异体蛋白，具有更强的荧光(在 485nm 激发下比野生型强 35 倍)和在哺乳动物细胞中有较好的表达。激发峰在 488nm，发射峰在 507nm pET-28a 质粒载体上面携带一个 N-terminal His Tag ／Thrombin／T7 tag 结构以及一个可以选择的 C-terminal HisTag。克隆表达区域的编码框由 T7RNA 聚合酶转录。 二、具体步骤 (一) 重组质粒 PET-28a-GFP 的构建 先获取大量的目的基因，然后构建重组质粒，进而导入大肠杆菌通过对大肠杆菌的培养繁殖来让质粒扩增，以获取更多的质粒 具体操作; PCR、酶切等方法获取目的基因，酶切连接重组质粒—— PCR 实验用品： 材料：pEGFP-N3 质粒，0.2mlEP 管，取液器吸头，一次性手套。 试剂：ddH2O、10×Buffer、MgCl2、4×dNTP、引物、Taq 酶、质粒 DNA 模板、琼脂糖、Gold view。 设备：移液器，台式高速离心机，凝胶