生物制品：抗体药物.ppt

小分子抗体 小分子抗体的优点： 1. 制备方法较其他基因工程抗体简单。 2.免疫原性要比原来的McAb弱得多。如果将改形抗体构建成小分子抗体，更有可能消除其免疫原性。 3. 由于分子量小，小分子抗体更容易通过血管壁，穿透实体瘤，有利于肿瘤的治疗。 4. 由于没有Fc段，不能与非靶细胞的Fc受体结合，更能集中到达肿瘤部位，同时由于没有Fc调节IgG的分解代谢，在体内半寿期短，周转快，有利于放射免疫成像检查肿瘤。 小分子抗体的优点： 5. 分子小，能与分布于病毒表面凹槽的抗原结合，有利于病毒性疾病的治疗。 6. 在小分子抗体基因的3端接上适当的酶基因或毒素蛋白基因，即可大量产生酶连抗体或免疫毒素。 7. 在大肠杆菌中表达，可发酵生产抗体。从而降低成本，使抗体治疗得以普及。 Fab Fab抗体 1.结构：每一个 Fab 段即抗原结合片段（ fragment antigen binding ， Fab ），含有一条完整的 L 链和 H 链近 N 端侧的 1/2 。 2.特性：每个 Fab 段结合抗原是单价的，即只能结合一个抗原决定簇 Fab抗体 Fab抗体能保持其亲本抗体的抗原结合特异性和生物学活性，也是构建双功能抗体的理想元件可与许多毒素、酶融合。具有广泛的应用价值利用噬菌体抗体构建表达出有天然构象的 Fab段抗体库报道较多，且大多数都可以用相应抗原筛选出特异性抗体涉及感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤诊治等诸多领域。 FV 片段 FV片段由VH 和VL 组成，是抗体的抗原结合部位，分子量只有完整分子的1/6其分子小,免疫原性弱,能发酵生产,对实体瘤的穿透力强。可作为载体与药物、同位素、毒素等相结合，用于肿瘤的诊断和治疗、用于细胞内免疫，可看作是基因治疗的一种方案。 单链抗体ScFv 单链抗体ScFv 由抗体轻、重链可变区基因VH、VL之间通过一段连接肽基因拼接后表达形成的重组蛋白，大小为全抗体的1/6。 单链抗体ScFv 单链抗体ScFv抗原性低，是具有完整抗原结合部位的最小片段，能发酵生产，对实体瘤穿透力强，是用作生物“导弹”理想的材料。用它研制双功能、双特异、催化抗体和免疫毒素、抗体融合蛋白等具有广泛的应用前景。 双特异性抗体和双功能抗体 双特异性抗体和双功能抗体将一种抗体分子与另一种抗体分子或功能分子如毒素、酶、细胞因子、放射毒素等结合形成， 具有特异性高，针对性强，用量少，副作用小的优点，在肿瘤临床治疗中有着重要的意义。 重组单链抗体(ScFv) 1． 单链抗体的基因构建 制备ScFv的关键是得到可变区基因，引物的设计非常重要。因此可以根据FR-１和FR-４的碱基组成和顺序分别合成扩增VH和VL基因的PCR引物。 目前有两种拼接方法 一种是将接头设计在表达载体上，两端各有限制内切酶供VH和VL的插入。 另一种拼接方法是通过将接头的编码序列分别设计在扩增VH和VL引物中，用PCR直接合成ScFv基因， 在ScFv中，接头承担了与CL和CH1稳定作用相同的功能，维持VH和VL间的构象。接头必须使重、轻链可变区自由折叠，使抗原结合位点处于适当的构型。 2. 重组单链抗体的表达 (1) 在大肠杆菌中表达： ①直接在细胞质中表达；②与其他菌体蛋白融合，表达融合蛋白；③分泌表达具有功能的单链抗体。近来重组单链抗体的表达主要采用分泌表达方式。 (2) 在噬菌体内表达： 一种含有信号肽序列的噬菌体显示系统能用于克隆ScFv，并在大肠杆菌中，使ScFv基因与gpⅢ融合，以融合蛋白的形式表达于丝状噬菌体表面。 通过噬菌体呈现技术(phage display)产生亲和力和特异性更强的ScFv。 3. 重组单链ScFv抗体的应用 由于ScFv分子量小，免疫原性小，且易穿透致密的肿瘤屏障，进入实体瘤周围的微循环，缺乏Fc片段，去除Fc介导的受体结合，使得其快速地向肿瘤集中，因此通过与毒素基因重组，抗体将毒素定位于靶细胞，对靶细胞进行特异杀伤。 基因工程抗体优点 通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应； 基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位； 根据治疗的需要，制备新型抗体； 可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达形式，大量表达抗体分子，大大降低了生产成本。 Because flu vaccines are designed for mass consumption it is different from mAbs. Novel process and manufacturing t