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mi引物设计原那么
.引物的长度一般为15-30bp,常用的是18-27bp,但不应大于38,由于过长会导致其延伸温度大于74C,不适于TaqDNA聚合酶进行反响.
.引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3端相似性较高的序列,否
那么容易导致错配.引物3端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,也会使错误引发机率增加.
.引物3端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响.不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基,因此应当防止在引物的3端使用碱基Ao另外,引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反响失败.5端序列对PCR影响不太大,因此常
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