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(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN103087146A*
*CN103087146A*
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 103087146 A
(10)申请公布号 CN 103087146 A
(43)申请公布 日 2013.05.08
(21)申请号 201110345434.1
(22)申请 日 2011.11.04
(71)申请人 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中
国- 澳大利亚绵羊育种研究中心
地址 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市
沙依巴克区克拉玛依东街151 号
(72)发明人 张雪梅 李文蓉 贺三刚 张宁
刘明军
(74)专利代理机构 乌鲁木齐新科联专利代理事
务所 (有限公司) 65107
代理人 欧咏
(51) Int.C l.
C07K 1/14 (2006.01)
G01N 33/53 (2006.01)
权利要求书1页 说明书3页 附图1页
权利要求书1 页 说明书3 页 附图1 页
(54) 发明名称
一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法
(57) 摘要
本发明提供的一种高效提取绵羊皮肤组织蛋
白的方法，针对绵羊皮肤组织结构的复杂性，采用
冷冻破碎法粉碎组织，然后摸索出适合绵羊皮肤
组织的超声破碎条件，并通过涡旋使样品裂解更
充分，以便能提高皮肤组织的利用率，尽可能少地
破坏蛋白内的分子结构，产出高质量的蛋白。该方
法操作简单可靠，方便快捷，成本低廉，为体内皮
肤组织蛋白提取提供了成熟的高效的技术方法。
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CN 103087146 A 权 利 要 求 书 1/1 页
1. 一种高效提取绵羊皮肤组织蛋白的方法，其特征在于：分前处理、冷冻破碎、冰浴超
声、蛋白定量及SDS、Western-blot 的检测步骤 ：
步骤 1. 将冰浴皮肤组织样品拔毛处理，用预冷的1×PBS 洗涤3 次，吸干液体；称取
3
25-30mg 样品，置于预冷的2ml 离心管中，将其剪碎至0.8-1mm 的小块，置于-70℃冰箱中；
步骤2. 取上步样品，加入直径为5-7cm 无菌钢珠，置于TissueLyser LT 仪器中粉
碎，其频率50Hz，工作2-5min ；破碎后，取出钢珠，加入预冷的蛋白酶抑制剂的裂解液，其加
量为每 100mg 湿重组织加200-300µl，置于冰浴中超声破碎，其功率200W，工作10S，间隙
15S,25 次，且避免大量泡沫产生；
步骤3. 将超声后的样品置于漩涡混合器上涡旋30-40S，4℃、采用13000 转/ 分钟、离
心25-30 分钟 ；提取上清液，置于-70℃冰箱
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