酵母各种杂交.pptxVIP

酵母各种杂交会计学第1页/共37页相关知识： 1、顺式作用元件：存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列。包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件等，作用是参与基因表达的调控。2、反式作用因子（转录因子）：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。3、报告基因：是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因。第2页/共37页4、cDNA文库：以mRNA为模板，反转录合成双链cDNA ，各cDNA分子分别插入载体形成重组子，再导入宿主细胞克隆扩增。这些在重组体内的cDNA的集合即cDNA文库。第3页/共37页基本原理真核生长转录因子含有两个结构上可以分开的、功能上也相互独立的结构域组成的结构域：DNA结合结构域(BD)(DNA binding domain) 转录激活因子转录激活结构域(AD)(activation domain) BD：识别DNA上特定序列，转录激活域定位调控 基因的上游。 AD：与转录复合体其他成分作用，从而启动所调节基因的转录。Bait Prey AD X Y Expression DBD Reporter gene 酵母双杂交原理示意图 UAS 第4页/共37页 两个结构域分开时仍具有功能，但不能激活转录，只有他们以适当 途径在空间上相互靠近时，才能具有转录因子活性，激活报告基因的表达。 酵母双杂交系统利用杂交基因