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实验内容与结果 （一）AKP的提取 匀浆 → 抽提 → 丙酮、乙醇反复沉淀 → AKP纯酶液 注意事项： 所用有机试剂必须预先预冷。 提取过程中所有有机试剂浓度应计算准确，加量准确。 各阶段提取液需取出部分待测比活性。 第30页，共52页，编辑于2022年，星期一 （二）AKP比活性测定 1、 样品酶活性测定： 酶活性单位计算：在37℃下保温15分钟产生1毫克酚，称为该酶的1个活性单位（U）。 计算每毫升酶液的酶活性单位（U/mL） 2、样品酶蛋白含量测定： 计算每毫升酶液的蛋白含量（mg/ml） 3、比活性计算： 比活性（ U/mg）=每毫升酶液的酶活性单位/每毫升酶液的蛋白含量 4、注意事项： 注意各阶段的稀释倍数及取样量。 各管加样量要准确，注意反应时间。 第31页，共52页，编辑于2022年，星期一 实 验 七 碱性磷酸酶酶促反应动力学实验 第32页，共52页，编辑于2022年，星期一 实验要求 了解酶促反应动力学的研究内容及意义 通过检测不同温度条件下AKP的活性，了解温度对酶活性的影响 学习测定酶最适pH的方法，了解pH对酶活性的影响 了解底物浓度对酶促反应速度的影响，学习测定米氏常数（Km）的原理和方法。 第33页，共52页，编辑于2022年，星期一 实 验 原 理 酶促反应动力学是研究酶促反应速度以及影响此速度的各种因素的科学，如底物浓度、酶浓度、pH、