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荧光实时定量 PCR 结果分析问题 荧光实时定量 PCR 结果分析问题 2010-01-22 13：08Line Gene 实时荧光定 量 PCR 不同结果分析模式对检测结果的影响 目的探讨实时荧光定量 PCR 不同结果分析模式对检测结果的影响。方法用 Line Gene FQD 33A 型荧光定量 PCR 检测系统检测本院门诊和病房乙肝病人血 清 HBV DNA 77 份，分别用最大二阶导数法和样点拟合法进行结果分析。结果发 现两种分析方法的总体相关性较好(r=0.978)。但 HBV DNA 拷贝数含量105 时， 两种模式的相关性差(r=0.706)，此时，最大二阶导数法得出的数值要比样点拟 合法低(t=2.61,P0.05)，且易出现假阴性结果。结论虽然样点拟合法步骤较多， 但其结果更可靠，因此进行结果分析时，建议使用样点拟合法。而且当样本中 HBV DNA 拷贝数105 时只能使用样点拟合法进行结果分析。 实时荧光定量；聚合酶链反应；质量控制 7.数据分析： (1)相对定量：使用△Ct 法计算目的基因在不同组间的表达 差异。 (2)绝对定量：将样品的Ct 值代入标准曲线，以对目的基因进行定量。 (3)熔解曲线分析：确定产物特异性。主要实验步骤： 1.设计并合成 Real time PCR 引物。 2.引物溶解后使用 Promega 的 TaqDNA 聚