反相色谱柱维护保养手册.pdfVIP

常规反相分析色谱柱安装及使用维护指南 何谓常规反相色谱柱？ 4. 如系统在线混合生成流动相，预先检查流动相各组分的兼容性。例 那些在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C 、C 、C 或苯基等键合相的色 如，当磷酸盐缓冲液与高浓度乙腈(例如≥70%)混用时，可能发生盐 18 8 4 谱填料所装填的色谱柱，按反相色谱条件进行操作和分离。反相是液相 析出。 色谱中最常使用的分离模式，而C 柱是最常使用的反相色谱柱之一。 18 5. 了解色谱柱的操作使用限度。如果所使用的流动相条件、柱温、以及 样品溶液条件，不利于色谱柱寿命时，请使用保护柱以延长柱寿命。 新色谱柱开启和安装的推荐步骤： 6. 在使用流动相进行柱平衡之前，如果流动相中含有可能析出的缓冲 1. 使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓 盐，先使用5倍柱体积的有机溶剂-水溶液进行过渡。例如，在使用 冲盐和污染物。 40/60 甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前，先使用5倍柱体积的40/60 甲 2. 取用色谱柱时避免磕碰掉落。 醇/纯水溶液冲洗色谱柱。 3. 将色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上 7. 在常规分析过程中，每针或间隔若干针清洗柱内可能积累的污染物。 有箭头标明正确流向。 完成分析后，彻底清洗色谱柱，除去柱内缓冲盐和污染物。 4. 在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱。 8. 在色谱柱使用过程中，定期进行柱效测试，记录塔板数与压力，从而 5. 当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检 追踪监控色谱柱的性能变化。柱效测试方法应固定。 测器上(这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡) 。 9. 反相色谱柱应保存于100%乙腈中。如色谱柱使用于高温或极端PH条 6. 重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用 件，或停用色谱柱超过72小时，用100%乙腈保存色谱柱。 的流速。 10. 使用原配的柱堵头，确保堵头拧紧以避免柱内溶剂挥发。 7. 参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常 取放色谱柱时避免磕碰掉落。 需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。 8. 测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物，请联系沃特世化学 柱清洗与再生的推荐步骤： 消耗品部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于 压力升高，色谱柱峰形发生变化如出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔，分 柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱 离度降低，这些都强烈提示色谱柱受到污染。可采用以下步骤处理： 柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。 1. 如系统接有在线过滤器和保护柱，首先排查在线过滤器与保护柱，进 行更新替换。日常操作中，当压力升高10%或柱效降低10%时，就应 当使用2.1 mm内径色谱柱