第5章免疫凝集试验.pptVIP

间接免疫凝集试验的临床应用 抗体的检测： 用于检测细菌、病毒、螺旋体、寄生虫等感染后产生的抗体：如抗人类免疫缺陷病毒抗体、抗溶血素O、梅毒螺旋体抗体等。 用于检测自身免疫性疾病的抗体：如类风湿因子、抗DNA抗体和抗甲状腺蛋白抗体等。 用于超敏反应患者的抗体测定：如青霉素抗体、某些花粉抗体等。 第七节 临床常用免疫凝集试验试剂方法特点 重点提示 诊断菌液 载体颗粒 其他 一、诊断菌液 菌种应使用标准株，制备菌液时需经无菌试验证实细菌确已被杀灭，并采用比浊管比浊调整至所需浓度。 二、载体颗粒 红细胞：最常用绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力，且可长期保存而不溶血。 胶乳：聚苯乙烯胶乳颗粒或羧化聚苯乙烯胶乳颗粒。性能稳定，保存期长。 炭粉粒子 甲苯胺红颗粒 三、其他 质控物：标准血清、阳性对照血清、阴性对照血清等 试剂盒应2℃～8℃保存，切勿冻存，使用前使试剂接近室温(23℃～29℃)，摇匀后使用。 方法评价: 定性试验 简便和快速 敏感度低 应用: 菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定 在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。 （二）试管凝集试验 试管凝集试验 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5 试管凝集试验原理 结果 1 2 3 4 5 6 7 菌液 实验材料： 灭活的伤寒菌液 (7×108/ml), 待测血清 2. 方法： 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 0.5 弃掉 1 2 3 4 5 0.1 6 0.9 生理盐水(ml) 待测血清 对照管 0.9ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml ① ② ③ ④ 灭活的伤寒菌液 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 抗体稀释度 彻底混匀 56℃, 1h 结果 + 很小的凝集颗粒 混浊 - 无凝集现象 与对照相同 ++ 小、部分凝集块 中等混浊 +++ 大多凝集管底 轻度混浊 ++++ 大的凝集块 清亮 凝集程度 沉淀 上清 管底沉淀 凝集程度 最高稀释比例 待测血清的滴度 方法评价： 半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性 临床应用： 肥达试验 外斐试验 交叉配血试验 Page * 肥达试验 概念：肥达试验是一种试管凝集反应，最早由肥达（Widal）用于临床，故名。 用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或微孔板凝集实验,以测定血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。 原理：伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、体表抗原（Vi抗原）。其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达试验的检测项目。（但其检查有助于发现伤寒带菌者。）当抗原遇到特异性抗体（抗O及抗H）时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。 值得一提的是：由于检查抗体的肥达试验是一种间接诊断试验，故对结果的判断要综合分析。肥达试验阴性，亦不能排除患伤寒的可能。如有些伤寒患者，肥达试验始终阴性。 Page * 外斐试验 变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒立克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用OX19，OX2，OXk代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病。外斐试验采用试管凝集试验法。 第三节 间接免疫凝集试验 载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 NS 凝集颗粒 重点提示 间接免疫凝集试验的类型 正向间接免疫凝集试验 反向间接免疫凝集试验 间接免疫凝集抑制试验 协同免疫凝集试验 间接免疫血凝试验 颗粒免疫凝集试验 胶乳颗粒凝集试验 明胶颗粒凝集试验 炭颗粒凝集试验 甲苯胺红颗粒凝集试验 间接免疫凝集试验的概念 间接免疫凝集试验（indirect agglutination）：将可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、大小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，可出现肉眼可见特异性凝集现象。 一、间接免疫凝集试验的类型 （一）正向间接免疫凝集试验：测抗体 间接免疫凝集试验的类型 （二）反向间接免疫凝集试验：测抗原 间