Western-Blot实验步骤及关键分析解析 .docxVIP

【分享】个人整理 Western Blot!！！ 1 、 丙烯酰胺和 N，N-亚甲双丙烯酰胺,应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的 去离子水配制含有29% (w/v)丙稀酰胺和1% (w/v)N，N-亚甲双丙烯酰胺储存液 丙稀酰胺29g，N，N—亚甲叉双丙稀酰胺1g，加 H2O 至100ml。)储于棕色瓶， 4℃ 避光保存。严格核实 PH 不得超过7。0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催 化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤. 2、 十二烷基硫酸钠 SDS 溶液:10％(w/v) 0.1gSDS，1mlH2O 去离子水配 制，室温保存. 3、 分离胶缓冲液： 1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHC L 混合，加水稀释到100ml 终体积.过滤后4°C 保存。 4、 浓缩胶缓冲液： 0 。5mmol/LTris-HCL(pH6.8)：6.05gTris 溶于40mlH2O 中，用约48ml 1mol/L HCL 调至 pH6.8加水稀释到100ml 终体积。过滤后4°C 保 存。这两种缓冲液必须使用 Tris 碱制备,再用 HCL 调节 PH 值,而不用 Tris.CL。 5、 TEMED 原溶液四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀 酰胺的聚合。 PH 太低时， 聚合反应受