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分析研究猫白血病病毒的检测和及pol基因遗传进化现状 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：分析研究猫白血病病毒的检测和及pol基因遗传进化现状 1 1、材料与方法 2 2、结果 3 3、讨论 5 文2：计算机病毒的检测及防范透析 6 1计算机病毒的定义 6 2计算机病毒的特性 6 3计算机病毒的分类 7 4计算机病毒的防护 8 5结束语 10 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 分析研究猫白血病病毒的检测和及pol基因遗传进化现状 文1：分析研究猫白血病病毒的检测和及pol基因遗传进化现状 猫白血病(Feline leukaemia，FeL)是由猫白血病病毒(Feline leukaemia virus，FeLV)引起的一种以恶性淋巴瘤为特征的传染病，全身淋巴系统恶性肿瘤，免疫系统极度抑制和骨髓造血器官破坏性贫血是猫白血病的主要特征。1964年，Jarrett W F等[1]首次发现猫白血病病毒。同年，猫淋巴瘤病毒的传播在《Nature》杂志上有了第一次报道。这一开创性发现开启了对猫白血病病毒的研究，猫逆转录病毒学的研究领域也被打开[2]。FeLV属逆转录病毒科、肿瘤病毒亚科、C型肿瘤病毒属、哺乳动物C型病毒亚属，为有囊膜的单链RNA病毒，有FeLV-A、FeLV-B、FeLV-C和FeLV-T 4个亚型[3]。猫科动物中最常见的是FeLV-A亚型，FeLV-A最具传染性，可建立持久的病毒血症，但毒性最低。FeLV病毒基因组含有3个编码结构蛋白的基因，即gag、pol和env。其中，gag编码结构蛋白，pol编码逆转录酶，env编码病毒糖蛋白，3个基因按5′-gag-pol-env-3′次序排列[4] FeLV在全世界范围内流行，然而，患病率因地区、年龄、健康状况和人口密度等的不同而有很大差异。在不同的国家和地区，猫的生活方式和免疫时间的不同将会导致猫白血病流行的差异[5]。本试验通过对25份青岛地区的疑似猫白血病的临床样本进行PCR检测，并进行测序和遗传进化分析。通过实验室检查了解猫白血病的感染情况及病毒的变异情况，为临床上防治猫白血病及后续对FeLV病毒学的深入研究提供一定参考。 1、材料与方法 材料 25例临床样本来自2018年—2019年青岛地区动物医院，具有消瘦、贫血、饮食减少和精神沉郁等症状的疑似感染白血病的猫的口鼻拭子和肛拭子(其中19份口鼻分泌物，6份粪便) One Step RT-PCR Kit一步法反转录PCR试剂盒，诺唯赞生物科技(南京)有限公司产品;病毒核酸提取试剂盒，天根生化科技(北京)有限公司产品;6×LodingBuffer、DNA标准DL 2 000，宝日医生物技术(北京)有限公司产品。 BSC-1100-LIA2生物安全柜，东联哈尔仪器制造(北京)有限公司产品;SIGMA3K15离心机，Sigma(德国)公司产品;K8360全自动凝胶成像系统，科创锐新生物科技(北京)有限公司产品;T100PCR仪，Bio-Rad(美国)公司产品;PowerPac Basic核酸电泳仪，北京六一仪器厂产品。 方法 根据Ramírez H等的报道[6]，选择FeLV的pol基因设计引物，上游引物FeL-Pol-F:TGAATGTCCCTACCCGTT，下游引物FeL-Pol-R:GGATGGATGTCCTCTACCC，目的片段为601 bp，由青岛擎科生物公司合成。 -PCR检测 按照博日科技(杭州)有限公司的Simply P病毒DNA/RNA提取试剂盒产品说明书进行。使用诺唯赞一步法试剂配制25μL的反应体系，以提取的核酸为模版，进行RT-PCR扩增，反应条件为:反转录，50℃30min;预变性94℃3 min;94℃30 s，℃30 s，72℃1 min，35个循环;72℃7 min。PCR产物于凝胶成像仪下观察并记录结果。PCR检测阳性产物送至青岛擎科生物公司测序。 PCR产物的分子生物学分析 运用MegAlign、Mega5等软件，对PCR产物的测序结果进行同源性分析和遗传进化分析。 2、结果 临床样本RT-PCR检测结果 25份样品进行RT-PCR检测，共检测出FeL阳性样品14份，检出率为56%(14/25)，12个公猫样本中阳性6个，13个母猫样本中阳性8个(表1)。将14份RT-PCR检测阳性的产物送往测序，将测序成功的13个序列在NCBI上进行BLAST比对，所测序列与BLAST上FeLV参考株相似度为100%，表明检测到的样本为猫白血病病毒。 同源性分析 由图1可见，4个毒株YD-44、YD-50、YD-54、YD-66之间的核苷