体内药物分析实验_0.docxVIP

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2022-05-25 发布于天津
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体内药物分析实验_0.docx

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PAGE PAGE # / 3 最新资料推荐体内药物分析实验 HPLC 法测定大鼠血浆中的山奈酚1.1目的要求1.掌握血浆样品的前处理方法。熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。熟悉大鼠眼眶采血技术；熟悉方法学研究中其他评价内容。 1.2 主要实验材料与仪器山奈酚(Kaempferol)及其对照品，黄芩素(baicalein )，抗坏血酸，肝素，-葡萄糖醛酸苷酶 (-glucuronidase )和硫酸酯酶 (sulfatase )，分析纯甲醇，冰醋酸、无水乙醚，色谱纯乙腈；高效液相色谱仪，氮吹装置，恒温水浴，漩涡混合器，13000r/mi n台式离心机，不同规格移液枪 (5, 20, 50, 100, 200, 1000L ) 和容量瓶(10，25mL), 5~10mL 具塞离心管若干；雄性SD大鼠(180~220g)。 1.3 实验原理山奈酚吸收进入体内后，多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得，故米用加入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品，使代谢物水解后测定苷元山奈酚的浓度。实验以黄芩素为内标，HPLC法测定血浆中山奈酚浓度，对建立的方法进行方法学评价。 1.4 实验方法1.色谱条件： C18 柱(250mm4.6m,5m),配保护柱，柱温 40C；乙腈-0.5% 冰醋酸（35:65 ）为流动相，流速1mL/min ;检测波长370nm;进样量20L。溶液配制：取山奈酚对照品约2.5mg，精密称定，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并定容。精密吸取适量，分别用甲醇稀释成0.3、0.6、3、6、9、20 和30g/mL的标准系列溶液，置4C冰箱保存。另取黄芩素适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释至 0.1mg/mL的溶液，精密吸取1.5mL置10mL量瓶中，用甲醇定容，得内标溶液，置4 C冰箱保存。血浆样品处理：取大鼠血浆样品120L ,加入甲醇20L、1%冰醋酸（含2mg/mL 抗坏血酸）32L、-葡萄糖醛酸苷酶（20U/mL）和硫酸酯酶（6U/mL）的混合水溶液50L , 37C水浴温育30min后，加入内标溶液50L , 然后加无水乙醚2mL,漩涡混合5min ,于12019r/min离心5min ; 取上清液在氮气流下挥干，残留物用100L甲醇复溶，12019r/min 离心5min ,取上清液进样分析。专属性考察：取空白血浆、添加山奈酚与内标的空白血浆、血浆样品，按血浆样处理项下方法处理，照色谱条件项下方法进样测定。比较所得色谱图，考察血浆内源性物质是否干扰测定，药物及内标是否达到基线分离。最新资料推荐若有必要，适当调整色谱条件，已达到专属性要求。标准曲线制备：精密吸取120L大鼠空白血浆9份，分别加入20L不同浓度的标准系列溶液，制得0.0 （空白）、0.0 （空白+内标）、0.05、0.1、 0.5、1.5、3和5g/mL的山奈酚血浆标准溶液（每个浓度点平 …