解析云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定和遗传进化情况.doc

解析云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定和遗传进化情况 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：解析云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定和遗传进化情况 2 1、材料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：鉴定和测评对国企人力资源管理的激励作用 6 一、目前我国国有企业员工操作技能水平现状 6 二、测评与操作技能鉴定的关系 6 1.测评与操作技能鉴定具有相同目的，但侧重点有所不同 7 2.测评与操作技能鉴定操作方法存在一定差别 7 3.測评与操作技能鉴定服务对象相同，但所包含的范围不同 7 三、测评与操作技能鉴定在人力资源管理中的作用 8 1.测评与操作技能鉴定能够为国有企业员工培训方向提供依据 8 2.测评与操作技能鉴定使得员工评价更为客观真实 8 3.测评与操作技能鉴定能够为员工的职业发展提供导向 9 4.测评与操作技能鉴定能够为高技能人才队伍的建设提供思路 9 5.测评与操作技能鉴定能够有效激励国有企业员工 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 解析云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定和遗传进化情况 文1：解析云南绵羊感染吕氏泰勒虫的鉴定和遗传进化情况 泰勒虫属于泰勒科泰勒属的蜱传性血液原虫，寄生于牛羊和其他野生动物巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内。泰勒虫病可引起动物高热、消瘦、贫血及体表淋巴结肿大，降低动物的饲料报酬，在很大程度上阻碍了养羊业的发展[1，2]。自1914年首次在埃及报道泰勒虫病以来，已发现可感染羊的泰勒虫有11个种，我国至今已报道的泰勒虫有4个种，分别为吕氏泰勒虫()、尤氏泰勒虫()、绵羊泰勒虫()及环型泰勒虫()，其中吕氏泰勒虫和尤氏泰勒为主要感染虫株，现在所发现的泰勒虫以吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫及莱氏泰勒虫致病力最强[3，4，5，6，7，8，9] 云南地处热带亚热带山地高原，气候多样性造就了物种的多样性，为昆虫的繁殖带来了极大便利，各种蜱传动物疫病多有发生，尤其是蜱传性的虫媒病不断被发现。近年来，随着养羊业的迅速发展，羊泰勒虫病的发病趋势也在逐步上升，而该病在自然感染病例中多为隐性感染，临床上常被忽视，只有少部分病例表现出症状，给该病的发现及治疗增加了难度。之前所做的局部调查研究中，尚未发现云南有羊泰勒虫感染;本次检测发现高海拔冷凉地区发生绵羊泰勒虫感染，结合焦虫18S及基于核糖体小亚基RNA基因位点的分子生物学技术，完成云南绵羊吕氏泰勒虫序列分析，检测结果将有助于了解该地区绵羊泰勒虫病感染的种属特征。 1、材料与方法 材料 2019年5月份采集于昭通永善县马楠苗族彝族乡某绵羊养殖场的16份血液，采集对象为消瘦、结膜发白、部分有腹泻的羊。 姬姆萨染色液购自杭州天和技术服务公司，血液基因组DNA提取试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司，2×PremixTaq、DNAMarker购自昆明硕擎生物技术有限公司。 方法 血液样品收集于含有肝素钠的抗凝管中并保存待检。 取约5μL血液样品，均匀涂于载玻片上待自然风干后，加入姬姆萨染色液甲液固定10min，之后加入乙液染色30min后再用蒸馏水冲洗以去除染色颗粒，待染色血液涂片自然风干后置于100倍油镜下观察。 从血液样品中取出250μL血样移入离心管中，按照血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行操作，提取血液基因组置于-20℃保存备用。 采用全血基因组提取试剂盒提取基因组DNA，泰勒虫18SrRNA，SSUrRNA基因通过套式PCR扩增，引物序列见表1[6，10，11]。引物由昆明硕擎生物技术有限公司合成。用上述引物对提取的基因组DNA同时进行二重PCR扩增，反应体系(25μL)为μL，18SrRNA上下游引物分别为μL，模板2μL，灭菌蒸馏水补至25μL。反应条件为94℃预变性5min，94℃变性30s，58℃退火40s，72℃延伸50s，共进行30个循环;72℃延伸7min。反应结束后，用%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。套式PCR扩增泰勒虫SSUrRNA，外循环:μL，上下游引物分别为TheiF1、TheiR1各μL，模板2μL，灭菌蒸馏水补至25μL。反应条件为94℃预变性5min，94℃变性30s，58℃退火40s，72℃延伸50s，共进行30个循环;72℃延伸7min。内循环反应体系同外循环。反应条件为94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火40s，72℃延伸50s，共进行30个循环;72℃延伸7min。反应完成后PCR反应产物经胶回收试剂盒纯化后，送昆明硕擎生物技术有限公司测序，所得序列与GenBank18S序列进行比对以确定原虫的种属特异性，并采用邻接法构建系统发育树