实验大肠杆菌的培养和分离课件.pptVIP

思考题： A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？ 1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打 开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。 2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。 3、整个操作在酒精灯火焰旁进行 4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。 B、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你 用什么办法来估计培养基的温度呢？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的 温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 * 精品课件资料 思考题 C、为何要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养 基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠 落培养基，造成污染。 D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微 生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上 滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 E、如何检查培养基是否受杂菌的污染？ 将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生 则未受杂菌污染。 * 精品课件资料 （二）液体培养基接种培养 主要器具： 操作方法：先将接种环进行_____灭菌, ______后 的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基 中，加塞。置于____℃摇床振荡培养１２小时。 无菌操作：略 摇床 思考：如何冷却接种环？ 可通过接触试管内壁或未 长菌的培养基达到冷却的 目的。 接种环、摇床等 ３７ 灼烧 冷却 * 精品课件资料 （三）平板划线分离法 主要器具： 操作过程： 注意： 无菌操作方法：同前。 将培养皿______（盖在下），放于_____℃恒温培养 箱中培养__________小时。 在作第二次以及其后的划线操作时，要从 上一次划线的开始________划线。 接种环、 思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总 共进行几次灼烧灭菌？ 恒温培养箱。 每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。 末端 １２～２４ 倒置 ３７ * 精品课件资料 * 精品课件资料 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 * 精品课件资料 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。 2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？ 划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 * 精品课件资料 3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？ 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一 致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是 符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明 接种过程中，无菌操作还未达到要求。 * 精品课件资料 （四）稀释涂布平板法 主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管 操作过程： 先将培养菌液稀释（10-5~10-7倍） 用移液管或吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加 在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养 基平面上。在适当稀释度下，可培养得到相互分 开的的菌落。 将培养皿倒置（盖在下），放于３７ ℃恒温培养 箱中培养１２～２４小时。 划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落， 但操作复杂些。 * 精品课件资料 10g土样 从土壤中分离微生物 稀释涂布法 * 精品课件资料 （五）斜面接种及菌种保存 主要器具： 操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取___菌落， 再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种 在_____上， _____℃恒温培养箱中培养____小时 后，____℃ 冰箱保存。 无菌操作：同前 试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易 进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。 思考：菌种保存为何采 用斜面而不是平板？ 接种环、恒温箱、冰箱 单 斜面 ３７ ２４ ４ * 精品课件资料 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 * 精品课件资料 实验一 大肠杆菌的培养和分离 实验步骤： 一 配制LB培养基