基因芯片技术.pptVIP

2022/5/23 * 基因芯片制作的关键就是如何将大量的探针分子固定于支持物上,并保持探针分子的构像处于自然状态,使探针 DNA 分子能自由地与样品分子进行杂交。 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 第四节 基因芯片的杂交及结果分析 4.1 探针的标记 标记的方法通常是在反转录的底物中加入带有标记基团的寡核苷酸单体,通过反转录将标记分子渗入cDNA 分子中。 mRNA反转录标记方法直接影响DNA芯片分析结果的准确性及重现性。 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 4.2 杂交 在一定条件下,分子间氢键的断裂与恢复是 DNA/DNA、DNA/RNA 分子间选择性结合的根本动力,这一过程称之为杂交。 2022/5/23 * 与经典分子杂交的区别: 杂交时间短,30分钟内完成 可同时平行检测许多基因序列 影响杂交反应的因素: 靶分子浓度、探针浓度、靶分子和探针的序列组成、盐浓度及杂交温度和时间等。 2022/5/23 * 4.3 芯片结果读取与扫描仪 生物芯片的扫读（扫描）是指将与目的DNA（或RNA）杂交后、或与目的抗原、抗体、或受体等目的靶分子反应结合后的生物芯片上成千上万个点阵的生物反应结果阅读出来,转变成为可供计算机处理的数据。 荧光标记的生物芯片扫描仪按其原理与结构可以分为激光系统扫描仪和CCD系统扫描仪。 2022/5/23 * 基因芯片杂交结果要用专用的扫描系统读取。 B B A C D E 放大器 数模转换器 计算机 A:激光器 B:滤光片 C:二色镜 D:反光镜 E:关栅 2022/5/23 * 基因芯片扫描结果 不同的颜色代表一个探针点杂交上的带荧光标记的核酸分子数的差异。红〉黄〉绿〉兰〉紫 2022/5/23 * 基因芯片荧光侦测仪 高密度微点阵检测扫描系统 2022/5/23 * 高密度微点阵分析软件 图象分析系统 2022/5/23 * 4.4 生物芯片的软件系统与数据处理 当从芯片发出的荧光转换成数字输出后,数据文件就被定量和翻译,通过重叠芯片像线栅,软件对芯片上的每个点计算平均密度值,从而完成定量,通过对芯片上实验点和对照点的比较,选出杂交点,并定量。 2022/5/23 * 一个完整的生物芯片配套软件应该包括生物芯片扫描仪的硬件控制软件、生物芯片的图像处理软件和数据提取或统计分析软件,以及芯片表达基因的国际互联网上检索和表达基因数据库分析和积累。 2022/5/23 * 第五节 基因芯片的应用 1、基因表达分析 2、基因型及多态性分析 3、杂交测序 4、核酸和蛋白质相互作用的研究 5、疾病的诊断与治疗 6、药物开发 7、在营养与食品卫生领域的应用 8、在环境科学领域中的应用 2022/5/23 * 基因芯片在医学领域的应用 一、基因芯片可应用于疾病诊断 1）肿瘤的基因诊断 ? 例:Affymetrix公司,把P53基因全长序列和已知突变的探针集成在芯片上,制成P53基因芯片,将在癌症早期诊断中发挥作用。 2）用于诊断遗传性疾病 例:上海联合基因公司开发了β-地中海性贫血的检测芯片 2022/5/23 * 3）用于病原体的检出和确定 例:西安联尔公司开发了呼吸道病原体诊断芯片,可检出多种引起呼吸道感染的病原体。 二、用于组织配型 例:上海复旦长江生物医药股份有限公司开发了HLA分型芯片,目前已在国内各大血站投入应用。 三、药物研究 2022/5/23 * 检测与疾病相关的基因, 进而用于疾病诊断 目前主要涉及: 癌症、 心血管疾病、 血液病、 遗传性疾病、 神经系统疾病、 部分感染性疾病、 免疫反应相关性疾病 毒物引起的损伤等。 2022/5/23 * 基因功能分析研究 将成千上万个我们克隆到的特异性靶基因固定在一块芯片上,对来源于不同个体不同组织不同细胞周期不同发育阶段不同分化阶段不同病变不同刺激（包括不同诱导不同治疗手段）下细胞内的mRNA或逆转录所得的cDNA进行检测,从而对这些基因表达的个体特异性组织特异性发育阶段特异性分化阶段特异性。进行综合评定与判断,极大加快这些基因功能的确立。 2022/5/23 * 　生物芯片是八十年代末在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术,它主要是指通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对细胞、蛋白质、DNA以及其他生物组分的准确、快速、大信息量的检测。 2022/5/23 * 世界著名商业杂志《财富》对基因生物芯片领域非常看好,它在其1997年的