反相色谱柱的清洁和再生范本模板.pdfVIP

反相HPLC柱子的清洁和再生 反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术,主要是因为它适用于分析极大多数 的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物.大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水 物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的，含有疏水的机制也能 以同样的保留方式分离。 硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质。残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键 合填料中。图1描述了不同种类的能出现的硅烷醇，这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待 分析物合基质成分，特别是碱性成分。因为硅烷醇的pKa值大约是4.5,离子化能在中性pH条件 下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子 （有时候100ppm或更多）,而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些 化合物。残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶合短链键合相如 C2或C4上更让人烦恼。 使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的分析物－固定相表面的相互作用，这样 当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。例如，非常疏水的样品基质如玉米油， 高芳香物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质。 含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。尽管分析者想尽最大努力来保护 HP