酶促反应动力学实验.pptxVIP

会计学;实 验 原 理;3、酶催化反应的典型曲线是随着时间的延长，反应速度下降，由起初的直线变为曲线。 测定酶活性的所有反应速率的比较都必须依赖该曲线的线性部分，因此要测定最初反应速度，即底物浓度变化在底物起始浓度的5％以内的速度。 ;4、实验对象：碱性磷酸酶（AKP）;;三、底物浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶米氏常数的测定;Lineweaver-bulk（林－贝氏方程）方程： ;操作：;2、另取试管9支，做酶促反应：;酶液（ml）;酶活性计算及Km值求取 1、在37°C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位，从标准曲线查出释放的酚量（ug），以此计算处各管的酶活性（v）。 2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标，在坐标纸上作图，求出酶的Km值。;四、抑制剂对酶促反应的影响;;;操作;2、另取试管9支，做酶促反应：;酶液（ml）;酶活性计算及Km值求取 1、在37°C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位，从标准曲线查出释放的酚量（ug），以此计算处各管的酶活性（v）。 2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标，在坐标纸上作图，求出酶的Km值，并判断该抑制剂属于何种类型。;注意事项：