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变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验 一变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.30%丙烯酰胺（14.5g丙烯酰胺，0.5g双丙烯酰胺，用水溶解，定容至50ml，4℃，棕色瓶中贮存） 2、10%过硫酸铵（0.5gaps，溶于5ml去离子水中，4℃可储存数个月） 3、 10×Tbe缓冲液（10.8gtris，0.744gedta，5.5G硼酸，定容至100ml） 4、temed 5、 20-200dnamarker 1、配置10%的胶10ml：8m*10ml*60g/mol=4.8g尿素 6.1ML水 3.3ml30%acrylamide 1ml10×tbe 0.11mlaps 0.01百万分 2、立即将胶倒入两块板间并插好梳子，放置，待凝固30min，时间可以适当延长。 3.向电泳槽×Tbe中加入1，拔出梳子，用注射器多次冲洗取样孔，以尽可能消除未聚合的丙烯酰胺。 4、将dnamarker加到点样孔中，以120v（10v/cm）进行电泳直到燃料走到靠近底部的三分之一处，大约需要60-90分钟。 银染液的制备：实验前制备4℃水 1、固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddh2o混匀（通风厨中进行） 2.染液：将0.1gagno3溶解于100mld dh2o中，使用前加入1.5ml 37%甲醛溶液，储存于暗瓶中，以防与皮肤接触（在通风的厨房中） 3、显影液：将30gna2co3溶解于ddh2o中，冷却至4℃，使用前加1.5ml37%甲醛溶液（通风厨中进行），0.1m五水硫代硫酸钠150μl；（0.1mna2s2o3。5h2o：将2.48gna2s2o3。5h2o溶于100mlddh2o）。 1.染色液和显影液应立即使用和配制； 2、显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃； 3.甲醛蒸汽具有致癌作用，可在通风的厨房中使用； 4、实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色； 5、不得在透明盒内进行显色； 6、溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘； 7.溶液的体积必须足以完全浸没胶水； 8、显色过程中盘中须轻轻摇动。 1.固定：用小刀轻轻分离玻璃板，将带凝胶的玻璃板放入含有200ml固定剂的盘中。 子中，放在水平摇床上摇动20min或直至染料带完全消失 2.清洗：将固定液倒回烧杯中，然后用ddH2O清洗三次，每次2min 3、染色：把玻璃板放在盛有100ml染色液的盘子里，在水平摇床上摇动30min 4.显影：玻璃板在预冷ddH2O（不超过10s）中快速通过，并快速进入预冷（4℃） 显影液中，显色3-5min或直至所有的带都出现 5.停止：当出现透明条带时，添加500ml以前使用的固定液，轻轻摇动以停止显影 6、用ddh2o将凝胶洗2次，每次2min 7.干燥，扫描 8、拍照观察