WB原理、步骤与总结.docxVIP

实验原理 蛋白质印迹是把电泳分离的蛋白质转移到固定基质上，然后利用抗原抗体反 应来检测特异性的蛋白分子的技术，包括三个部分：SDS一聚丙烯酰胺凝胶电 泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。 SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于测定蛋白质相对分子质量，SDS是阴 离子去污剂，能断裂蛋白质分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏其高级 结构。SDS与大多数蛋白质的结合比为1.4:1,由于SDS带有大量的负电荷， 与蛋白质结合时掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别，使各种蛋白质带有相 同密度的负电荷,形似长椭圆棒,蛋白迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈线 性关系。因此,利用相对分子质量标准蛋白所作的标准