染色体畸变-病.pptx

染色体畸变与染色体病;细胞遗传学的发展史;1957年， Peter. C.Nowell和DA. Hungerford 用外周血淋巴细胞培养成功，简化了取材的方 法，并发现从四季豆中提取的植物学球凝集素 （phytohemagglutinin,PHA）是促进淋巴细胞分 裂的必要因素； 1959年多种染色体病核型相继发现;什么是染色体？;1979年T.C.Hsu将人和哺乳动物细胞遗传学的发展分为四个阶段： 低渗前时期：以Painter为代表 低渗时期：1952~1959 三体时期：1959~1969 现代时期：1968年以后，各种染色体带型相继出现。;人类染色体核型的制定;第一节 人类的正常核??; 核型： 一个体细胞中全部染色体系统排列所构成的图像 核型分析：将一个细胞的全部染色体按照染色体的大小、着丝粒位置及其他特征配对、排列，以确认其是否具有正常的核型组成的过程。 核型表示: 染色体总数，性染色体组合 例：４６,ＸＸ ； ４６,ＸＹ 显带染色体带的标示：① 染色体号; ② 臂号; ③ 区号; ④ 带号 例：1P31 ；14P12 ；2q24;二. 显带核型 （一）染色体显带技术 1. Q带 芥子喹丫因处理染色体，荧光显微镜观察； 2. G带 胰酶消化，吉姆萨染色； 3. R带（反带） 盐溶液处理，吉姆萨染色； 4. T带 加热后，吉姆萨染色，观察端粒； 5. C带 NaOH和Ba(OH)2处理染色体，吉姆萨染色，观察着丝粒 和次缢痕。 ;（二）染色体显带原理 Q显带原理： 1968年荧光染料喹丫咽氮介（QM）被用于染色体标本染色，发现每对染色体出现明暗相间的特异性带型，其原理是QM分子的三环插入到染色体DNA分子中，同DNA分子的磷酸呈离子键结合，DNA分子中AT和CG对QM有不同的亲和力。AT/CG的比例不同，决定了荧光的强弱，在染色体上显现明暗不同的带型（称Q带）。Q显带标本可以区别出每一条染色体，尤其是Y染色体长臂远端发出最强的荧光，非常容易识别。（间期核中亦可看到Y—小体）;G显带原理： 1971年，用胰酶处理法（Giemsa染色）得到了与Q带相似的带纹，可在普通光学显微镜下看到清晰的深浅相间的带型，称G带。且染色标本可长期保存，被迅速推广应用。经过胰蛋白酶消化后，染色体上的DNA暴露，由于Giemsa染料对A-T碱基的亲和力比对G-C碱基强，从而呈现深浅相间的带型。一般来说，G浅带的DNA含丰富的GC碱基，并富含Alu重复顺序，大部分能表达的基因都在G浅带里，（因此，在G浅带的染色体畸变容易产生病理性的表现型。）G深带含丰富的AT碱基，含丰富的L1重复顺序，但能表达的基因含量较少。位于G深带的DNA复制较G浅带为迟。;C显带原理：各染色体着丝粒周围含丰富的结构性异染色质（constitutive heterochromatin),而染色体两臂含常染色质。经过Ba(OH)? 和高温盐溶液处理，Giemsa只对结构异染色质深染，故称C带。其特点是各染色体着丝粒区深染，1，9，16号染色体的次缢痕及Y长臂末端异染色质区被深染。;R显带原理： 高温盐溶液处理 →Gimsa染色→光学显微镜下观 Hochest33258和Brdu处理细胞→PI或丫啶橙染色→荧光显微镜下观察； Brdu和胸腺嘧啶处理→CA3和DA染色→荧光显微镜下观察。 ;姐妹染色单体互换（sister chromatid exchange, SCE) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine, Brdu)DNA分子， 经过两次复制后，两条链均掺入Brdu，染色后颜色变浅。;微核实验（mininuclus);X小体（Barr body)和Y小体(Y body);高分辨（High Resolution) 染色体制备;荧光原位杂交技术（FISH）：利用非同位素标记物标记DNA探针，与染色体标本上的染色体进行原位杂交，采用不同检测系统，在荧光显微镜下杂交的DNA显示不同颜色的荧光。（CGH—比较基因组杂交技术，用于肿瘤研究。）;（三）染色体显带核型的识别 1.界标：确认每一染色体上具有重要意义的、一个稳定的、具有显著形态学特征的指标； 2.区：两个界标间的区域； 3.带 4.亚带;FISH检测微小缺失;FISH检测（chromosome painting)染色体易位;FISH检测（Rx-FISH)染色体倒位;多色FISH技术;三. 分子细胞遗传学 1.荧光原位杂交 2.DNA纤维荧光杂交 3.染色体涂染技术 4.比较基因组杂交;染色体着丝