药敏试验及耐药检测PPT课件.ppt

;感染性疾病的实验诊断--药敏试验及耐药检测;;重点掌握;;Antibiotic Resistance A Global Problem;耐药机制 ;2.生物化学机制 产生灭活酶或钝化酶使抗生素失活。如β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯霉素乙酰基转移酶。 作用靶位的改变使抗生素失去作用位点。如MRSA产生青霉素结合蛋白2a。 主动外排机制　如铜绿假单胞菌其外膜存在着独特的药物泵出系统。 细菌生物膜的形成。 ;;抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility test AST）;肠球菌 A组：氨苄西林、青霉素 B组：达托霉素、利奈唑胺、奎奴普汀/达福普汀、万古霉素? C组：高水平庆大霉素、链霉素 U组：环丙、左氧、诺氟沙星、呋喃妥因、四环素 ;铜绿假单胞菌 A组：头孢他啶、庆大霉素、妥布霉素、哌拉西林 B组：阿米卡星、氨曲南、头孢吡肟、环丙、左氧、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦，替卡西林? U组：洛美或氧氟沙星、诺氟沙星 ;常用药敏试验的方法 ;纸片扩散法（改良Kirby-Bauer法，K-B法） ;*;;;稀释法 Dilution antimicrobial susceptibility test;;浓度梯度纸条扩散法（E test） ;;联合药敏试验 ;抗菌药物联合应用目的在于： ①治疗单一用药可能不能控制的混合感染 ②治疗单一抗菌药物不能有效控制的严重细菌感染 ③治疗病因未明的严重感染 ④预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生 ⑤减少药物的毒性反应;耐药菌检测试验 ;2、超广谱β内酰胺酶的检测（extanded spectrum beta-lactamases, ESBLs） ESBLs由革兰氏阴性杆菌产生，质粒编码，其活性可被β内酰胺酶抑制剂抑制，可通过转化、转导、接合、转移等方式传递，易于造成耐药菌流行。 检测包括纸片法筛查和确证试验。产ESBLs的克雷伯菌属、大肠埃希菌和奇异变形杆菌应报告对所有青霉素类、头孢菌素类（包括头孢吡肟）以及氨曲南耐药，但不包括头霉素、碳青霉烯类和含β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂。;; KPC酶能水解除头霉素外的各种β内酰胺类抗生素，可由肠杆菌科细菌产生。 改良Hodge试验 ;4、耐甲氧西林葡萄球菌（methicillin resistance staphylococci, MRS）筛选 MRS多是MecA基因编码了对β-内酰胺类药物低亲和力的蛋??PBP2a，取代了固有的青霉素结合蛋白PBPs。 MRS的简便检测方法是用头孢西丁纸片扩散法，要基于头孢西丁的结果报告苯唑西林敏感或耐药。 MRS不论其体外药敏试验结果如何，其对所有的β-内酰胺类药物和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂均无临床疗效；绝大多数的MRS具有多重耐药性，包括氨基糖苷类、大环内脂类、四环素类。 临床治疗MRSA引起的感染首选万古霉素。;;5、耐青霉素肺炎链球菌检测试验（penicillin resistance streptococcus pneumonia, PRSP） K-B法 OX19 mm时做青霉素MIC≧2 μg/ml ;6、高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌（high-level aminoglycosde resistance, HLAR） K-B法 庆大霉素120μg，出现中介结果（7-9 mm）需补做MIC进行确证。;7、万古霉素耐药的肠球菌（vancomycin-resistant Enterococcus） VRE 对万古霉素耐药主要有5种表型VanA、VanB、VanC、VanD和VanE，除VanC为天然耐药外，其余均为获得性耐药。VanA、VanB可通过质粒将耐药性传递给其他肠球菌或其他种类的细菌，若传递给MRSA，则会导致VRSA的出现。 VRE的简便检测方法是用纸片扩散法，对于中介的结果（15-16mm）需补做MIC。 ;8、克林霉素诱导耐药试验（D-实验） 克林霉素能被红霉素诱导产生耐药，靠近红霉素纸片的克林霉素纸片抑菌圈出现“截平”现象，像字母D。 检测葡萄球菌;药敏试验结果的表示及其临床意义 ;中介(intermediate,I)： ①抗菌药对感染菌的MIC接近该药在血液和组织中通常可达到的浓度，感染菌的临床应答率可能低于敏感菌。 ②意味着某些药物在生理浓集的部位(如尿液中的喹诺酮类和β内酰胺类)具有临床效力，或者可用。 ③若某药在高剂量使用时是安全的(如β内酰胺类)，则中介意味着高于通常剂量的药物进行治疗可能有效。 ④中介还意味它是一个缓冲区，避免微小的、未能控制的技术因素造成重大的结果解释错误，特别是对那些药物毒性范围窄的药物。;剂量依