《色谱分析》教学课件—02经典液相色谱法.pptVIP

2.1 柱色谱法 column chromatography （2）吸附柱色谱 操作步骤 以硅胶柱层析为例 装柱及试样的加入 洗脱及检测 洗脱液的合并及浓缩 检测纯度 （1）常用吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺及大孔吸附树脂。 填料及色谱柱的选择 2.1 柱色谱法 column chromatography 柱色谱法由于仪器简单，操作方便，柱容量大，目前已广泛应用在天然药化、生化等领域。 硅胶柱层析法分离纯化花生根中白藜芦醇的工艺。 通过薄层色谱与硅胶柱层析试验，确定最佳纯化条件为：洗脱剂（氯仿：甲醇40:1），流速30 ml/min，m(硅胶):m(样品)=1:1，重结晶后，采用高效液相色谱测定其纯度为97.01 %。 特点：设备简单，分析速度快，常用作定性分析 2.2 平面色谱法（ Planar Chromatography） 图2-2平面色谱分离 装置示意图 是在平面上进行分离的一种色谱方法。 （3）分离原理 液体 分配色谱 溶解能力 Partition Chromatogrphy 离子交换剂 离子交换色谱(IEC) 离子交换能力 Ion Exchange Chromatography 凝胶 空间排阻色谱 (SEC) 分子尺寸大小 Steric Exclusion Chromatography 2.薄层色谱法 (Thin layer chromatography,TLC ） 薄层色谱法是平面色谱法中应用最为广泛的方法。 该色谱法是将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，显色后供试品某组分的斑点与标准物质的斑点进行比较，用于定性鉴别、检查或含量测定。 薄层色谱法的分离机制与柱色谱法相同，主要包括吸附、分配、离子交换和空间排阻色谱法等。 因此有人称其为“敞开的柱色谱”。 吸附剂或载体的选择及薄层板制备 点 样 展 开 定 位（显色） 定性分析 2.薄层色谱法(Thin layer chromatography,TLC ） 0.3% CMC溶液 Silica gel, [SiO2]n 吸附剂 调浆 涂布 固化 活化 薄层板 1. 硅胶 silica gel 2. 氧化铝 aluminium oxide 3. 聚酰胺 polyamide 操作过程：铺板→点样→展开→显色→定性分析 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-3mm, 点间距离约为1.5-2.0cm。 操作过程：铺板→点样→展开→显色→定性分析 图2-3薄层色谱法 点样示意图 操作过程：铺板→点样→展开→显色→定性分析 图2-4双槽层析缸及上行展开示意图 A展开剂蒸气预饱和过程 B 展开过程 上行展开是目前薄层色谱法中最常用的一种展开方式。将点好样的薄层板放入已盛有展开剂的直立型层析缸中，斜靠于层析缸的一侧，展开剂沿薄层下端借毛细作用缓慢上升，待展开剂距离薄板高度的4/5时，取出薄层板，做好前沿标记，挥干溶剂后进行斑点定位。如图2-4所示。该方式适用于硬板的展开。 被分离物质极性 吸附剂活度 展开剂极性 强极性 弱极性 强极性 思考题1：应从哪些方面考虑选择薄层色谱展开剂？ 弱极性 强极性 弱极性 选择吸附色谱的分离条件时，必须从_____ ，______，_______，三个方面综合方面。 操作过程：铺板→点样→展开→显色→定性分析 图2-5 薄层色谱法斑点定位方法示意图 通用型显色剂:有碘、硫酸溶液和荧光黄溶液等。 专属型显色剂:根据物质的特征反应进行选择 图2-6 白术 （紫外显色） 图2-7 桂枝（试剂显色） （1.阴性2.对照药材3~5.供试品） (1.对照药材2~4.供试品.5.阴性) l0 l 起始线 前沿线 比移