TLC生物自显影技术在药物筛选中的应用.docVIP

TLC生物自显影技术在药物筛选中的应用 张静技术方法及原理 原理：TLC生物自显影是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的药物筛选方法。利用薄层板将混合物(如植物提取物)在薄层板上展开后,将薄层板与接种了病原微生物(人体致病菌或植物致病菌)的培养基相接触,通过一定的培养,非活性部位会被生长出的病原微生物所覆盖而呈现背景色,活性部位因抑制了病原微生物的生长而呈现抑制斑点,这样就可从混合物中筛选出活性成分。 TLC生物自显影技术对抗菌/真菌化合物的筛选方法： ①琼脂扩散法:较早被使用的一种方法,以接种了病原微生物的培养基为载体,将吸附了待测化合物的薄层板与培养基表面相接触,在0～4℃的条件下培养过夜，利用化合物的扩散性质,将吸附在薄层板上的化合物转移到培养基表面,取走薄层板,培养基在37℃左右的条件下培养过夜以进行生物自显影。 ②直接TLC生物自显影检测法:与琼脂扩散法不同,以薄层板为载体,将用特定营养液配成一定浓度的病原微生物的悬浮液直接喷洒到点样并展开的薄层板上,在潮湿避光的环境下培养一段时间即可直接或通过四唑盐溶液显色的方法观察到实验结果。 ③琼脂覆盖法:是前2种方法的杂合,将接种了细菌或真菌的熔融麦芽汁琼脂培养基均匀涂布在点样并展开后的薄层板上,待琼脂凝固后,将薄层板在30℃左右的条件下培养过夜[10,13],用四唑盐染色后,即可观测到实验结果。 技术应用 该法在天然药物化学中的一个主要用途是指导分离天然提取物中具有抗菌/真菌活性的化合物。根据TLC生物自显影的结果,可对天然提取物不同部位的生物活性进行评估,进而有目的的进行下一步的提取分离。另外,对于单体活性化合物,可利用TLC生物自显影测定出化合物的最小抑菌浓度。将该值与对照品的MID相比较,从而能够推测出该化合物的活性大小。部分利用TLC生物自显影筛选天然产物中抗菌/真菌活性化合物的应用情况见表1（部分）。 优势与不足 优势：它无需特殊的仪器设备,操作简单,实验耗费低,灵敏度和专属性高,生物活性的测定速度快。并且,由于薄层色谱展开技术的应用,TLC生物测定法不仅可对化合物的 生物活性进行测定而且对化合物的代谢产物或转化物的生物活性也可同时进行测定。 不足：TLC生物自显影法对各种具有细胞毒性的化合物如喜树碱素、quassinoid类和木酚素类化合物不敏感，大部分的此类化合物在TLC板无法形成抑制斑点。此外,TLC生物自显影法并不适用所有极性的化合物，由于TLC生物自显影使用的微生物培养基一般用水作溶剂,极性较大,因此要求被测化合物的极性不能太大也不能太小。 总结 TLC自显影技术是一种非常适合于在天然药物化学实验室开展的生物活性测定方法。TLC生物自显影技术的应用空间很大,其起初主要用于对具有抗菌/真菌化合物的筛选,后来发展到对自由基清除剂及抗氧化剂、胆碱酯酶抑制剂的筛选,相信随着天然药物化学与其他相关学科的相互渗透,其用途还会更加拓宽。