细胞的原代与传代培养.pptxVIP

细胞的原代与传代培养;原代培养技术得重要意义: 原代培养得最大优点就是细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具有二倍体得遗传性,而且大多数细胞表现出原来组织得特性。 利用原代培养做各种实验,如药物测试、细胞分化及病毒学方面得试验效果很好。 原代培养也就是建立各种细胞系(株)必须经过得阶段。 ;原代培养;贴块法;93;解离释放细胞得方法 ;动物细胞原代培养流程得示意图 ;器材和液体得准备;方法与步骤(举例:心肌细胞消化培养法);(3)消化及分散组织块:将上述清洗过得组??放入无菌三角烧瓶内,加入5～6倍量得0、1％胰蛋白酶液(pH7、4 ～ 7、6),置37℃恒温磁力搅拌器上分次消化:每次消化8-10分钟。在超净台中吸出胰蛋白酶液于带盖离心管中,加入2滴血清终止消化。直到组织块基本消化完全。 各管配平后离心,收集细胞,无血清培养液洗2-3次后,将细胞悬液用两层灭菌纱布过滤至另一烧杯中。;(4)计数与稀释:从过滤得细胞悬液中取出1ml滴于血细胞计数板上,按白细胞法进行计数;计数后用培养液稀释,稀释后得浓度一般以每毫升含30 ～50万个细胞为宜。 (5)分装与培养:将稀释好得细胞悬液分装于细胞培养瓶中,盖好瓶盖,在培养瓶上做好标记,置于37℃得CO2培养箱中培养。 (6)观察:逐日检查培养物就是否污染,观察细胞生长情况。待细胞已基本长成致密单层时,即可进行传代培养。 ;大家有疑问的，可以询问和交流; 原代细胞培养结果:;贴块培养步骤图解 ;; VSMCs原代培养第4天和第9天(×100);二、传代细胞培养;传代培养就是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:3比率转移,接种到另一培养瓶得培养。 贴壁培养细胞得传代通常就是采用胰蛋白酶消化,把细胞分散成单细胞再传代。 悬浮型生长细胞则用直接传代法或离心法传代。;方法与步骤;(3)用Hanks液洗涤1次,加入适量培养液,反复吹 打细胞,使其成细胞悬液。 (4)以1:2或1:3进行分装,并在培养瓶上做好标 记,注明代号、日期,轻轻摇匀, 37 ℃CO2 培养箱培养。 (5)观察:细胞培养24h后,即可观察培养液得颜 色及细胞得生长情况。 ;; VSMCs传代培养第1天和第3天(×100)